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mnng诱导大鼠胃癌前病变模型的建立 癌症是最常见的肿瘤之一。通常，假设这种疾病应该经历多年的持续癌前病变。因此，对胃粘膜癌前病变与癌前病变的关系进行了研究，对正确理解和处理乳腺癌前病变具有重要的理论价值和临床指导作用。WHO于1972年提出胃癌前病变,包括胃粘膜上皮异型增生(gastric epithelial dysplasia,GED)、肠化生(intestinal metaplasia, 简称IM)等。最近很多研究证实GED是一种重要的癌前病变,而IM作为一种癌前病变争议较大。有人认为IM不是癌前病变,而只是癌旁病变。本研究模拟引起胃癌的复合因素诱发大鼠胃癌前病变模型,研究胃癌前病变(GED与IM)之间及其与胃癌之间的关系。 1 材料和方法 1.1 动物 SD大鼠(本校实验动物中心提供,符合辽宁省实验动物一级标准)74只,体重165 g±8 g,♀♂各半,分笼饲养。 1.2 日本酶企业及工业协作企业 N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)购自日本片山工业株式会社。Tween-80购自大连医药集团化玻公司。去氧胆酸钠购自上海行知化工厂。 1.3 大鼠胃粘膜病变mnng 第1组:MNNG普通组。10只,1 g/L MNNG生理盐水,5 ml/只灌胃,隔日1次,共10次,后改为0.1 g/L MNNG生理盐水自由饮10天。 第2组:MNNG加强组。24只, MNNG溶于0.4% Tween溶液中1 g/L,5 ml/只灌胃,隔日1次,共20次,后改为自来水。 第3组:MNNG胆汁组。10只, MNNG溶于0.4% Tween溶液中1 g/L, 5 ml/只, 0.2%去氧胆酸钠溶液2 ml/只, 隔日交替灌胃各10次。 第4组:MNNG乙醇组。10只,MNNG溶于0.4% Tween溶液中1 g/L, 5 ml/只,60%乙醇 2 ml/只,隔日交替灌胃各10次。 第5组:MNNG复合组。10只,MNNG溶于0.4% Tween溶液中1 g/L,灌胃 隔日1次, 共10次,间隔日以60%乙醇与0.2%去氧胆酸钠溶液各2 ml/只交替灌胃各10次。 第6组:对照组。10只,正常饲养。 实验共进行45周,于实验第20周开始每周均对各组中随机处死或病死的大鼠进行尸检,观察癌前病变生长情况。尸检时除对各主要脏器均取材外,重点对胃进行详细检查。将胃沿大弯侧剖开,平铺于硬纸板上,仔细观察记录胃粘膜肉眼改变并照相。对可疑部位取电镜标本(1 mm×1 mm×1 mm大小)。余下部分置10%中性福尔马林溶液中固定。固定后沿小弯平行方向分块取材,每块宽0.4~0.5 cm,将全胃分成6~8块。石蜡包埋,4 μm厚切片,分别经HE染色及PAS/AB(pH 2.5)染色。 取电镜标本大鼠胃31例,经2.5%戊二醛固定,常规制样,在日本产JEM-2000EX型电子显微镜下观察拍照。 1.4 病理诊断标准 胃粘膜上皮异型增生(GED)的诊断分型和分级参照吉井隆博提出的标准。 2 结果 2.1 动物对不同疾病的病理观察 2.1.1 ged与胃粘膜 大部分病变发生在幽门腺区的小弯侧,包括2例腺癌、27例GED和5例胃溃疡,只有6例GED发生于胃底腺区。胃粘膜表面常不光滑,皱襞减少,病变多为不规则的肿块,由粟粒大至黄豆大。直径1~10 mm。较大的病变呈菜花样肿物。 2.1.2 ged的类型 实验组大部分大鼠的胃粘膜有病变,早期表现为不同程度的糜烂或溃疡,晚期则出现腺体的增生及不同程度的异型增生。2例胃癌出现于观察时间最长(45周)的MNNG普通组。经形态学和PAS/AB(pH 2.5)染色认定33例GED均为胃型(表1),甚至在同一腺腔里呈现不同程度的增生,PAS/AB(pH 2.5)染色,显示PAS染色阳性。4例异型增生的细胞为胞浆嗜碱的主细胞型,腺体扩张呈圆形或椭圆形的囊腔,位于胃底腺区的腺体底部;2例为胞浆嗜酸的壁细胞型,腺体扩张呈圆形或椭圆形的囊腔,也位于胃底腺区的腺体底部;2例为干细胞型,位于幽门,细胞较小、立方形、排列密集、形成比较长的隐窝,异型性大的隐窝较迂曲。 2.2 动物实验导致不同的疾病和一系列疾病 见表2,各组均未发现肠化。 2.3 胞浆内质网 可见异型细胞核增大,形状不规则,多呈杆状,有的核膜有皱褶凹陷;核常染色质增多,异染色质颗粒增粗,聚集成团块并靠近核膜内侧,有的核仁明显;胞浆内粗面内质网较丰富;有的具有粘液颗粒,细胞之间有丰富的微绒毛。 3 讨论 3.1 细菌细胞致病活性 胃粘膜的干细胞(增殖细胞)位于腺颈部并牢固附着于基膜,向上以“滚梯式运动”使有发达连接的表面上皮同步移动,不断更新;向下形成以单个细胞移动、连接松散并具有分泌功能的腺上皮。本实验虽观察到在动物实验早期,大部分大鼠的胃有糜烂或溃疡,但反复的损伤和修复