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植物体内一氧化氮的分子功能研究进展 no（nit）是自然界发现的最小分子之一。生物历史学家长期以来一直关注植物和微生物氮循环的重要作用。在20世纪80年代前后，研究人员不仅发现它不仅能在动物细胞中合成，还能参与许多重要的生理和病理过程（如记忆、糖尿病、癌症和药物中毒），引起了人们的广泛研究兴趣。1992年，科学将no列为“年度分子”。1998年，三名美国科学家（包括福克郡、米洛德和ignaro）获得了当年的诺德生理奖，这促进了其他生物（包括植物）中no信号系统的研究。现在，我知道no是生物中分布最广泛的信号要素之一。除了母乳喂养外，它还起着重要的信号要素作用，例如原始动物、细菌、母乳喂养植物。在植物中，对no的研究主要集中在（i）no的出现上。（2）生命功能；（3）信号转导；（4）遗传因素的调整；（5）内容分析诺的水平。 1 植物细胞内no的来源 关于NO在植物体内产生的研究已经进行了几十年.第一次在植物体内观察到NO的产生是Klepper等在用除草剂和水杨酸处理大豆时发现其叶片能够释放出NO气体.几十年来, 尽管对植物体内NO的合成进行了广泛的研究, 但对植物细胞内NO的来源仍然存在较大争议.目前较清楚的是NO能在植物细胞内内源产生, 可通过 (i) 类似于动物的NO合酶 (NOS-like proteins) , (ii) 硝酸还原酶 (nitrate reductases, NR) 和/或 (iii) 非酶促反应 (nonenzymatic reactions) 三条途径完成. (见图1) 1.1 动物细胞nos活性 NO合酶催化一个依赖于L-Arg (arginine-dependent) 的NO合成途径:L-Arg+NAD (P) H+ H++O2→L-Citr + NAD (P)++NO.在哺乳动物细胞中, 已经鉴定了三种同工型的NOS (nNOS, eNOS和iNOS).在植物中是否存在类似于动物细胞中的NOS?生物化学分析表明植物组织提取物中能检测到依赖于L-Arg的L-Citr和NO合成活性 (即存在L-Arg向L-Citr和NO的转变) , 这种活性能被哺乳动物的NOS抑制剂 (L-Arg类似物, 如L-NAME) 所抑制, 抑制剂不但阻断了NO的形成而且阻断了NO介导的一些反应.电子显微免疫定位分析显示这些NOS-like蛋白可能定位在细胞质、过氧化物酶体、叶绿体和细胞核中.结果表明植物中具有动物细胞NOS的同源物.免疫学实验也显示哺乳动物NOS的抗体能和植物蛋白发生免疫交叉反应.但Butt等的蛋白质组学分析却表明和哺乳动物NOS的抗体发生交叉反应的植物蛋白和NOS无关, 这些蛋白是热激蛋白和糖分解的酶.此外, Crawfard研究小组从拟南芥中发现的不同于哺乳动物NOS的NO合酶 (AtNOS1) 的功能尚待进一步确认.因而该基因被重新命名为NOA1(nitric oxide associated 1) , 以避免和动物的NOS混淆, 至今仍有证明植物中NO合酶活性存在的报道.如Corpas等用一种对NO更敏感和特异的基于化学发光的新方法 (ozone-chemiluminiscence method) 分析了在豌豆幼苗生长发育过程中, 叶、茎和根中内源性NO的生成, 在这三种豌豆器官中检测到了组成型的、依赖于L-Arg的NOS活性, 并且这种NOS活性对氨基胍 (一种不可逆的动物NOS抑制剂) 敏感;同时还证明NO主要在维管组织 (木质部) 、表皮细胞和根毛中合成和积累, 叶片中NOS的活性最低.植物中NOS-like蛋白的存在似乎毋庸置疑, 但尚未从拟南芥中发现具有确切NOS功能的基因或蛋白, 在拟南芥基因组中也未能发现动物NOS的同源物.NOS的活性令人困惑! 植物NOS研究领域充满挑战, 同时存在重大突破的机遇.采用生化分析和巧妙的筛选策略分离相关突变体仍然是值得思索和实践的有效途径. 1.2 亚硝酸还原为no的活性 20世纪80年代中期, 研究结果已表明植物中的NO能通过硝酸还原酶生成.硝酸还原酶 (位于胞质) 通常催化硝酸还原为亚硝酸, 但其大约1%的活性 (表现为亚硝酸还原酶的活性) 能利用NADH作为还原剂进一步将亚硝酸还原为NO.但这个活性与质体中亚硝酸还原酶 (NiR) 的活性不同, 后者利用6个电子将亚硝酸还原为铵.在无氧或缺氧条件下, 植物通过硝酸还原酶生成NO已在完整的植物, 叶片和根中广泛地观察到, 利用纯化的酶 (NR) 也能检测到NO的生成.目前, NR是植物中唯一确认能够形成NO的酶, 它成为植物体内信号转导和防御反应中产生NO的主要候选酶, 许多实验证据已把NR和NO的信号转导作用联系起来.通过硝酸还原酶生成NO可能是植物NO的一个主要来源. 某些报道认为除胞质NR