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高效动物血红素蛋白粉中卟啉铁的测定 血液中的原始蛋白粉是由新鲜动物血液精制而成的新鲜空气。经过先进的生物提取和提取工艺后，它充满了富含高纯度酪氨酸铁的新蛋白质。提取过程不加任何化学试剂, 确保产品绿色天然本质。产品的机体吸收利用率超过90%, 无耐药性、无残留、无毒副作用, 是21世纪最为理想的高效畜用补铁蛋白原料。 卟啉铁以0.1mol/L氢氧化钠为溶剂配置成的溶液在300~400nm波长之间扫描吸收光谱, 在 (385±2) nm波长处有最大吸收。血红素蛋白粉以0.1mol/L氢氧化钠为溶剂溶解后, 采用紫外分光光度计能直接测定血红素蛋白粉中卟啉铁的含量。该方法快速、准确, 操作简单。 1 材料表面 1.1 测试设备 紫外分光光度计, U-2910, HITACHI。 1.2 测试试剂 卟啉铁标准品 (Sigma公司) 、0.1mol/L氢氧化钠溶液、血红素蛋白粉 (由上海杰隆生物制品股份有限公司提供) 。 2 方法 2.1 标准使用液配制 准确称取经105℃干燥至恒重的血红素标准品10.00mg, 用0.1mol/L氢氧化钠充分溶解并定容至100mL容量瓶中作为标准品储备液。吸取此储备液10mL加于100mL容量瓶中, 加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度, 摇匀, 配成10μg/mL的标准使用液。再利用0.1mol/L氢氧化钠将标准使用液分别稀释成0.0μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL的浓度, 用0.1mol/L氢氧化钠作空白调零, 于385nm处测定吸光度, 并绘制卟啉铁浓度-吸光度标准曲线。 2.2 氢化钠溶液配制 取不同批次血红素蛋白粉 (编号A-E, 共5份) , 准确称取一定量, 一边研磨一边加入0.1mol/L氢化钠溶液, 充分溶解后定容至100mL容量瓶中。吸取10mL液体加于100mL容量瓶中, 加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度, 摇匀, 用0.1mol/L氢氧化钠作空白调零, 于385nm处测定吸光度, 依据标准曲线计算样品中卟啉铁含量。 2.3 定容容量的测定 准确称取一定量血红素蛋白粉, 一边研磨一边加入0.1mol/L氢化钠溶液, 充分溶解后定容至100mL容量瓶中。吸取10mL液体加于100mL容量瓶中, 加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度, 摇匀, 用0.1mol/L氢氧化钠作空白调零, 于385nm处测定吸光度, 重复以上操作5次, 依据标准曲线计算样品中卟啉铁含量。 2.4 ml容量瓶 准确称取两份一定量的血红素蛋白粉, 一边研磨, 一边加入0.1mol/L氢化钠溶液, 充分溶解后定容至100mL容量瓶中。吸取10mL液体和1mL方法2.1中标准品储备液加于100mL容量瓶中, 吸取10mL液体和2mL方法2.1中标准品储备液加于另一100mL容量瓶中, 分别加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度, 摇匀, 用0.1mol/L氢氧化钠作空白调零, 于385nm处测定吸光度, 依据标准曲线计算试样中卟啉铁浓度。 2.5 容量瓶及容量瓶 准确称取一定量的血红素蛋白粉, 一边研磨, 一边加入0.1mol/L氢化钠溶液, 充分溶解后定容至100mL容量瓶中。吸取10mL液体加于100mL容量瓶中, 加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度, 摇匀, 放置0h、0.5h、1h、4h、12h后用0.1mol/L氢氧化钠作空白调零, 于385nm处测定吸光度。 3 血红素蛋白粉浓度与吸光度的关系 3.1按照上述方法测定标准浓度血红素在385nm处的吸光度, 各点重复5次检测结果见表1。可以看出该方法检测标准曲线各点的吸光度非常稳定, 变异系数不超过1.59%, 平均相关系数r=0.9997, 表明卟啉铁的浓度与吸光度有良好的线性关系。 3.2 按照上述方法测定5份血红素蛋白粉样品在385nm处的吸光度, 检测结果见表2。检测结果表明血红素蛋白粉中卟啉铁含量均在13.50%以上。 3.3 按照上述方法测定血红素蛋白粉在385nm处的吸光度, 进行重复试验, 检测结果见表3, 变异系数0.83%, 表明该方法测定样品中卟啉铁含量有很好的重复性。 3.4 按照上述方法进行回收实验, 测定结果见表4。加入1mL标准储备液和2mL标准储备液测得回收率分别为98.99%和99.53%。 3.5 按照上述方法分别对放置0h、0.5h、1h、4h、12h后的样品进行测定, 结果见表5。放置12h内吸光度基本无变化, 表明该方法测定样品中卟啉铁含量稳定性较好。 4 络合分光光度法 本试验采用分光光度计直接测定血红素蛋白粉中卟啉铁含量, 相对于MIBK法和硝化络合分光光度法等方法操作非常简便, 检测结果可靠性高, 无害无污染, 且很多试验表明