海藻酸钠接枝聚乙烯亚胺基因转染性能研究.doc

PAGE 16 目 录 TOC \o 1-2 \u 摘 要 1 Abstract 1 前言 2 1 材料与方法 3 1.1 实验仪器 3 1.2 实验材料 3 1.3 实验方法 3 2 实验结果 6 2.1 MTT法测共聚物对细胞毒性 6 2.2 Bel7402、MSCs细胞转染绿色荧光蛋白质粒后的绿色荧光的观察 9 2.3 聚合物与表达绿色荧光质粒（DNA）复合物在细胞中的转染率 10 2.4 聚合物与表达VEGF质粒（DNA）复合物在MSCs细胞中的表达率 13 3 讨论 13 3.1 聚合物的细胞毒性 13 3.2 聚合物与表达绿色荧光质粒（DNA）复合物在细胞中的转染率 14 3.3 聚合物与表达VEGF质粒（DNA）复合物在MSCs细胞中的表达率 14 4 结论 14 结束语 15 参 考 文 献 16 综述 17 致 谢 20 诚 信 声 明 21 摘 要 目的：制备新型阳离子基因载体，以降低细胞毒性、提高基因转染效率。方法：通过聚乙烯亚胺（PEI）上的氨基与多醛基海藻酸（MASA）上的醛基反应，将PEI2000引入MASA形成梳型接枝共聚物Alg-g-PEI。采用MTT法评价聚合物对肝癌细胞Bel7402和鼠骨髓间质干细胞（MSCs）的细胞毒性。以Alg-g-PEI为基因载体，以Bel7402、MSCs为靶细胞，以绿色荧光蛋白（GFP）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）为靶基因，分别进行细胞转染实验。结果：PEI 25k比，Alg-g-PEI的细胞毒性低，基因转染效率高，最高可达56.18%（GFP）和9318pg/ml（VEGF）。结论：通过本方法得到的新型基因载体Alg-g-PEI的确能降低载体的细胞毒性、提高其基因转染效率。 关键词：多醛基海藻酸钠；聚乙烯亚胺；基因转染 Abstract Objective:To prepare a new cationic gene vector to decrease the cytotoxicity and improve the gene transfection efficiency. Methods: Polyethyleneimine with molecualr weight of 2000 (PEI 1.8k) was linked to multialdehyde sodium alginate to form the comb copolymer of Alg-g-PEI through the condensation of amino groups in PEI with aldehyde groups in MASA backbone. The cytotoxicity of copolymer to bel7402 cells and rat Mesenchymal stem cellls (MSCs) was evaluated by MTT method. The cell transfection experiments were perfomed using Alg-g-PEI as gene vector, Bel7402 and MSCs as target cells, Green Fluorescent Protein (GFP) and vascular endothelial growth factor (VEGF) as target gene, respectively. Results: Compared to PEI25k, Alg-g-PEI has lower cytotoxicity and high gene transfection efficiency, and the maximum of transfection efficiency is 56.18% (GFP）and 9318pg/ml (VEGF)。Conclusion: The new gene vector of Alg-g-PEI prepared by this method successfully reduce the cytotoxicity and improve the transfection efficiency. Keywords: multialdehyde sodium alginate,Polyethylenimine,Gene transfection 前言 基因治疗顾名思义是指利用遗传物质来治疗疾病，这里的遗传物质可以是患者本身的，也可以是外源遗传物质。具体治疗的措施包括通过纠正或补偿基因的缺陷抑或是阻止表达不正常的基因的表达，从而达到阻止病