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大鼠脑震荡模型的建立 脑震荡是临床上常见的疾病之一，可导致病变的主脑损伤和后续脑损伤。但迄今对其发生机制尚未完全阐明。传统的自由落体脑震荡损伤模型,动物常在麻醉下进行,这与临床伤病员的致伤状态和机制不尽相同,且无法观察到临床患者常出现的先昏迷再清醒的过程,方法也较繁杂。为克服以上不足,笔者研制了一种新的自由落体装置,以期为脑震荡发生后损伤机制的阐明和早期防治研究奠定基础。 1 材料和方法 1.1 内套管c 装置由底座、固定杆、砝码、升降螺丝、外套筒(内、外径相差2 mm)、定位重锤及内套筒等部分组成,其中砝码C有3种规格,即C1200 g,C2100 g和C350 g;内套筒G有G1,G2,G33 种相应的内径,与砝码配套使用,其外径均为外套筒的内径减去0.5 mm,内径为不同砝码的直径加上0.5 mm;另有内套筒G4,固定有重锤F,用以进行头部定位。底座上放置一专用木板,用以固定大鼠并调节大鼠头部的位置。 1.2 不同动物单次撞击后,动物分组 实验选用56只清洁级健康雄性Wistar大鼠,体重(200±20)g,由本院动物中心提供。动物随机分组,分别为A1,A2,B1,B2,C和D组,其中A1,A2组分别接受50 g砝码撞击;B1,B2组分别接受100 g砝码撞击;C组接受200 g砝码撞击;D组为正常对照,不予撞击。C组为6只动物,其余各组均为10只动物。撞击时,砝码下缘距动物头部撞击部位为1 m。 1.3 内套管gp的安装 以100 g砝码为例。 专用木板固定大鼠四肢,清醒状态下放置于底座上,以镊子轻轻固定其头部,调节升降螺丝的位置,使砝码C2上缘与G2上缘相平齐时,C2下缘与大鼠头部的垂直距离为1.0 m,将内套筒G4置于外套筒E中,调节木板的位置,使F定位于大鼠头部双耳前缘与眼后缘的正中连线。迅速换上内套筒G2,将砝码C2放于G2中,使C2垂直并自由落下,即可对大鼠头部造成损伤。 200 g砝码和50 g砝码的致伤过程与此类似,分别调节D的位置,并采用不同的内套筒G1和G3。 1.4 宏观病理检查 伤后立即观察大鼠的意识状态、行为、呼吸和心跳,对活存动物于清醒后(全部清醒约需2 h)经心脏多聚甲醛灌注,开颅,进行宏观病理检查后取脑,10%中性福尔马林固定,常规制片,HE染色。对即刻和迅速死亡动物则立即开颅取脑,检查内容同上。 1.5 迷实验的训练 对A1,B1和D组大鼠,于试验前4 d进行迷宫实验训练,每天1次,伤后1 d进行迷宫实验。实验时,每只大鼠在迷宫中行走10次,计数其10次中错误次数,每组10只大鼠,求其平均值,并进行各组之间统计学分析。 1.6 统计分析 迷宫实验结果采用单因素三水平设计资料的方差分析。 2 结果 2.1 振动能量和脉冲能量的估计表1 如表1所示,随砝码质量的增加,大鼠头部承受的动能也相应增大,对大鼠的打击力也相应增加。 2.2 动物急性毒性b A1,A2组:50 g砝码击中大鼠头部后,20只动物中3只动物出现轻微抽搐,继之精神变差,活动缓慢,3只动物于撞击后2 h内死亡(A1组1只,A2组2只),其余动物无抽搐,仅见活动缓慢。 B1,B2组:100 g砝码击中大鼠头部后,即刻见动物四肢痉挛,持续5~10 min后,出现婚迷,呼吸及心率减慢,于3~5 min后清醒,但行动迟缓,精神差。4只动物(B1组1只,B2组3只)于15 min内死亡。 C组:200 g砝码击中大鼠头部后,即刻见动物四肢痉挛,持续2~3 min,出现昏迷,呼吸及心率减慢,所有动物于5 min内死亡。 2.3 两组患者平均统计学差异 伤后1 d,A1和B1组大鼠较D组错误次数增加,且具有统计学差异,但A1组与B1组间无统计学差异。提示大鼠的学习记忆能力在撞击后1 d呈下降趋势(表2)。 2.4 光镜观察与病理改变 死亡动物即刻进行剖检,肉眼见50 g和100 g组死亡动物均出现硬脑膜下点灶状出血,尤以砝码直接击中的顶枕部出血最严重,并有血凝块附着(图2)。200 g组死亡动物出血范围广泛,呈现全脑性出血。50 g和100 g组清醒后活杀动物,肉眼仅见点灶状出血,但较死亡动物略轻。 光镜下,脑部病理改变主要为出血及神经元缺血性改变,各组部位及程度不同。 A2组:主要病变部位为海马、额叶及颞叶,呈现散发性微灶状出血,可见轻度水肿,神经元皱缩,尼氏体减少,胞核形状不规则,呈缺血性改变。 B2组:主要病变部位为海马、额叶及颞叶,呈现局灶性出血,神经元上述变化加重(图3)。 C组:上述部位多发大面积出血,小脑出现局灶性出血,神经元变化与B2组相似。 3 大鼠脑震荡伤后的临床表现和学习记忆 建立颅脑损伤模型的主要目的是通过动物实验,研究人体各种颅脑损伤的发生机制和防治措施,要求该模型的病理变化及其损伤机制与临床实际相接近并具有较好