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北京苔草种子休眠原因的研究

苔草科是五味子科的一种多年生草本植物。世界上大约有2000种。中国大约有500种苔藓草植物，北京有35种，2种。苔草属植物株型紧凑,形态优美,具有春季返青早、生长季长、耐干旱的特点,可作为草坪地被植物应用于城市园林绿化中,具有较高的开发利用价值。但苔草属植物种子常常由于成熟度不一致、贮藏条件差异以及种群在漫长自然进化过程中形成的生态适应性等原因,造成种子具有一定程度的休眠,这对开发推广利用苔草资源、进一步实现苔草种子商业化生产造成严重制约。据报道,苔草属的某些种可以在土壤中休眠6年而保持种子活力。

国内近年对苔草属的研究主要集中于两大方面,一是苔草属植物在生态系统中的地位、功能和养分转化及对水文情势的响应等方面,尤其是对东北三江平原湿地生态系统中毛苔草(C.lasiocarpa)和乌拉苔草(C.meyeriana)与环境的相互作用关系的研究很深入;二是对苔草属植物种质资源调查、引种驯化、打破种子休眠、栽培繁育等园林应用的研究,第二方面研究的数量和深度均不及前者。其中打破苔草种子休眠的研究内容包括用机械处理和不同化学药剂处理种子,以期提高发芽率和发芽势,结果表明,浓硫酸(H2SO4)处理、氢氧化钠(NaOH)处理、赤霉素(GA)与6-苄基腺嘌呤(6-BA)混合处理比较有效。

国外对苔草属的研究涉及面很广,包括生理生态、遗传多样性、植株内有机物的提取及其分子式鉴定、种子休眠与萌发特性等。对苔草种子休眠的研究主要从生态适应性上入手,内容包括原生境的群落组成,周年温度、光照、水分变化动态,实验室内不同光周期、光质、温度梯度、变温与恒温、湿冷层积与干冷层积等变量对苔草属植物种子休眠及萌发的影响。结果表明,光暗交替、变温和冷湿层积等因素有利于苔草种子萌发。

层积处理是一种古老而有效的打破种子休眠的方法。在层积处理期间种子中的抑制物质含量下降、种皮软化、提高透性、种胚发育后熟,为种子发芽提供了有利条件,已在打破多种植物种子休眠上取得较好效果。但湿冷层积处理对苔草种子内源激素和可溶性糖等生理生化指标的影响鲜有报道,本研究以4种苔草种子为材料,探讨层积处理对苔草种子休眠及萌发的影响,并从种子生理的角度探讨休眠机理,为指导生产实践提供依据。

1材料和方法

1.1供试种子及种子

供试苔草种子(小坚果)于2008年5月2日-12日在北京草业与环境研究发展中心小汤山草圃基地采收,4种苔草分别为矮苔草(C.humilisvar.nana)、披针苔草(C.lanceolata)、青绿苔草(C.breviculmis)和涝峪苔草(C.giraldiana),所有供试种子经清选,去除杂质和空瘪粒后装入牛皮纸袋放于室内风干备用。层积处理、发芽试验、可溶性糖和淀粉测定于2008年7-11月在北京草业与环境研究发展中心实验室进行,内源激素含量测定试验于2008年12月在中国农业大学农学与生物技术学院植物生理与生化实验室测定。

1.2方法

1.2.1种子放置与搅拌

将种子与湿润细沙按体积比1∶3混匀,装入塑料袋内,在4~5℃冰箱中放置60,90,120和150d,定期搅拌翻动种子以保持良好的通气。待层积时间到后取样,用蒸馏水冲洗干净,用于发芽试验和生理指标测定。

1.2.2种子滤纸的制备

参考王彦荣的方法进行发芽试验。采用培养皿纸上发芽法,光照培养箱设置为15/25℃变温(夜温15℃,16h;昼温25℃,8h),光照度为5000lx,相对湿度RH=75%,在直径为9cm培养皿内铺单层滤纸,用蒸馏水浸润滤纸,将苔草种子均匀放置于滤纸上;3次重复,每重复100粒种子,以未经层积处理的种子为对照,逐日统计发芽数,计算发芽率和发芽指数,计算公式为:

发芽率=总发芽数总种子数×100%=总发芽数总种子数×100%

发芽指数=∑t=1nGtDt=∑t=1nGtDt

式中,Gt是第t天的发芽数,Dt相应于Gt的发芽天数。

1.2.3内源激素含量检测

用酶联免疫法测定。将层积处理后取样的种子用液氮冷冻15min,然后放入-20℃冰箱保存,待所有样品收集齐后,统一测定内源激素含量[包括脱落酸(ABA),赤霉素(GA),生长素(IAA),玉米素核苷(zeatinriboside,ZR)]。在测定时将样品表面干燥,准确称取干样500mg,3次重复,按中国农业大学植物生理与生化实验室提供的酶联免疫试剂盒测试程序测定。

1.2.4紫外分光光度法

采用蒽酮比色法:将取样的种子放入培养皿中萌发3d后,称取0.5g,放入50mL的三角瓶中,加沸水25mL,在水浴锅中加盖煮沸10min,冷却后过滤,滤液收集在50mL的容量瓶中,水洗后定容至刻度,作为可溶性糖提取液。吸取0.5mL提取液于大试管中,加入1.5mL蒸馏水,