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蛋白质复性方法及其注意事项

蛋白前期准备

查阅目标蛋白相关文献，了解其等电点，标签等注意点。

如果目标蛋白易降解，可在纯化时加1-2mMDTT，全程低温，及时处理。

透析Buffer的选择可参考文献。

蛋白复性

包涵体：在某些生长条件下，大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子，它们致密地集聚在细胞内，或被膜包裹或形成无膜裸露结构，这种水不溶性的结构称为包涵体(InclusionBodies，IB)。

在E.coli中累积的重组蛋白会迅速地以包涵体形式被沉淀出来，这些包涵体蛋白是丧失生物活性的不可溶的错误折叠蛋白的聚集体。

包涵体的处理一般包括这么几步：包涵体的洗涤、溶解、纯化及复性。

如果过表达蛋白在包涵体中，那么通常有两个选择可以考虑：(1)退一步，优化表达条件；⑵

接受包涵体并采取策略来将蛋白溶解以及复性。这里主要考虑第二种方案。

接受包涵体并采取策略来将蛋白溶解以及复性。

这里主要考虑第二种方案。

包涵体的洗涤

破碎细胞都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质

量的减少，加入蛋白酶抑制剂等，还可通过选择pH

量的减少，加入蛋白酶抑制剂等，还可通过选择

pH、温度

或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提E

洗涤Buffer:50mMTris-HCI(pH8.0),2mMEDTA,2mMDTT150mMNaCI,1