蛋白纯化方法翻译.docxVIP

不同纯化技术的基本建议和条件

亲和色谱层析（AC）

亲和色谱层析是基于蛋白质或者蛋白质的某一个基团能够可逆的同偶连在柱材上一个配体结合而分离纯化的过程，这项技术可以作为筛选或者纯化蛋白的过程，它只需要能够找到一个可以和目标分子就有足够特异性结合的配体并偶连到柱子上就可以使用。亲和色谱层析通常具有高分辨率和高亲和容量的性质。亲和色谱层析通常作为双步纯化的第一步来进行，在进行完亲和色谱层析后通常还有一步其它方法的纯化来进一步除去杂质。

目标分子一般是可逆的结合在柱材上面的配体上，上样时使用的条件通常是有利于目标分子同配体分子结合的。没有结合的分子可以通过冲洗而除去，而结合上去的目标分子则可以通过有利于其解离的洗脱条件而得到收集。洗脱时需要特定的条件，常常是竞争性的把目标分子游离出来，如改变PH、离子强度或者极性等。样品会因结合而富集，并以纯化且浓缩的形式被洗脱下来。在图A9.1中表示了亲和色谱层析的主要步骤。有时候亲和色谱层析也可以用来除去特定的杂质，例如苯米脒。Sepharose4FastFlow可以除去丝氨酸蛋白酶。

图A9.1经典的亲和纯化

离子交换色谱层析（IEX）

离子交换色谱层析是基于蛋白质具有不同的表面电荷的特性的分离方法，它具有高分辨率和高上样容量的特性。离子交换色谱层析依赖于蛋白质表面带的电荷和具有相反电荷的柱材颗粒只见可逆的相互作用而达到