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纳他霉素对真菌防腐抑菌效果的影响

纳托霉是一种含有大量有毒化合物的新生物活性剂。它对污染食品的细菌、细菌和其他细菌都有很强的抗菌效果，尤其是在牛奶、果肉、果汁、饮料、葡萄酒等食品中。本研究从不同试验菌量、培养时间和试验方法等方面观察了纳他霉素对真菌防腐抑菌效果及影响因素,比较试验样品和对照样品防腐抑菌效果的差异,为纳他霉素对流质食品和非流质食品防腐应用提供依据。现将研究结果报告如下。

1材料和方法

1.1菌种和试菌种

以随机抽检样品纳他霉素为试验样品,纯度为≥80%(山东华狮啤酒有限公司生产)。纳他霉素对照样品为北京东方瑞德生物技术有限公司生产,纯度为≥50%。均为2004年度生产出厂。

试验菌种为黄曲霉菌(3.3924)、青霉菌(3.4064)和酵母菌(2.399),由中国科学院微生物研究所提供。培养基分别为MEB肉汤、MEA培养基、察氏琼脂,均由北京陆桥技术有限责任公司生产,压力蒸汽灭菌后备用。

1.2方法

1.2.1察氏培养基的制备

取黄曲霉菌、青霉菌28℃培养48h的MEB肉汤培养物,接种罗氏瓶,并均匀布满察氏琼脂培养基表面,吸出多余液体,置28℃培养7~9d。然后用吐温80生理盐水溶液,刮洗霉曲分生孢子,将孢子悬液移入装有玻璃珠的三角瓶中振摇,滤过除去菌丝,再经5000r/min离心20min去除菌丝。酵母菌直接使用MEB肉汤培养物。

1.2.2酶

称取试验样品纳他霉素用MEB肉汤溶解定容,使有效成分浓度为1600mg/L。用MEB肉汤进行对倍稀释制成有效成分不同浓度试验样液,分装到灭菌试管中(1ml/管),每管接种100μl菌液混匀,一式3份,为3个梯度含菌量,置于30℃培养2~7d观察结果。

1.2.3平板稀土元素和养基的稀释

取纳他霉素浓度为1600mg/LMEB肉汤。用溶化的MEA培养基和察氏琼脂稀释,制成不同浓度培养基试验样液,充分摇匀后分别倾注平板,每个平板接种10μl菌液均匀分布,对照样品组按试管稀释法进行。一式3份,为3个梯度含菌量,置于30℃培养2~7d观察结果。

1.2.4mic的测定

琼脂稀释法观察平板上试验菌株的生长情况,以无菌生长的浓度为MIC,表明药物对试验菌株有抑制作用,单一菌落生长可忽略不计。试管稀释法观察试管内试验菌株的生长情况,试验样液澄清表明无菌生长,药物对试验菌株有抑制作用,无菌生长的浓度即为MIC。所有试验均重复3次。

2结果

2.1最低抑菌浓度mic的确定

琼脂稀释法结果表明,试验样品纳他霉素对最高接种菌量的黄曲霉菌、青霉菌和酵母菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为2.5、5.0、1.25mg/L。结果显示,接种菌量的变化直接影响纳他霉素对试验菌株的最低抑菌浓度值(表1)。

2.2培养时间对黄曲霉菌、青霉菌和酵母菌最抵抑菌浓度的影响

琼脂稀释法测定结果表明,随着培养时间的延长,抑菌效果逐步降低,72、120、168h三个不同培养时间对黄曲霉菌、青霉菌和酵母菌的最抵抑菌浓度均显增加趋势(表2)。结果显示试验观察时间长短对试验结果有明显影响,培养时间越长纳他霉素对试验菌株的抑菌效果越差,推测纳他霉素对食品的防腐效果亦会随时间延长而降低。

2.3菌株的抑菌浓度

采用试管稀释法和琼脂稀释法结果表明,试管稀释法测得试验样品对黄曲霉菌、青霉菌和酵母菌的最低抑菌浓度分别为1.25、1.25、0.62,而琼脂稀释法测得的结果分别为2.5、5.0、1.25,试管稀释法测定的效果明显高于琼脂稀释法(表3)。结果提示,在食品生产中应用纳他霉素作为防腐剂时,流质食品和非流质食品的使用剂量上要有所区别。

3纳他激素的防腐抑菌效果

食品生产和保藏很容易受到霉菌、酵母等真菌的污染,食品特有的营养物质和适宜环境因素给真菌的繁殖提供了必要条件,真菌孳生造成食品的腐败变质,缩短了食品的保质期。纳他霉素作为一种抑制和杀灭霉菌、酵母等真菌的高效、广谱的防腐剂,越来越广泛地应用于食品防腐领域中。

本研究采用琼脂稀释法和试管稀释法分别对纳他霉素的防腐抑菌效果进行的研究结果表明,纳他霉素对所试黄曲霉菌、青霉菌和酵母菌具有较强的抑制作用。研究发现,应用琼脂稀释法测定的纳他霉素对大多数真菌的最低抑菌浓度为1.25~5.0mg/L,试管稀释法测定的最低抑菌浓度为0.62~1.25mg/L。结果提示,在食品生产中应用纳他霉素作为防腐剂时,应控制流质食品和非流质食品的使用剂量,流质食品的使用剂量应不低于1.25mg/L,非流质食品应不低于5.0mg/kg。

研究结果证明,不同接种菌量和培养时间对纳他霉素抑菌效果存在影响,提示纳他霉素防腐效果随污染菌量的增加而降低;对食品的防腐效果随时间延长而降低。故在选择纳他霉素防腐剂量时应考虑被防腐食品的原料污染状况、产品性质、加工工艺