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针刺足三里、太冲穴对腹泻型肠易激综合征大鼠血液及肠组织中vip和npy的影响

肠压综合征（ibs）是一种慢性肠疾病，具有从腹痛或腹部不适和粪便习惯的特点。由于脑肠轴的变化和影响，脑肠轴的变化和影响在ib的发病中起着重要作用。脑肠素作为一种具有双神经释放功能的小分子知识分子，在调节内脏感觉、分泌和运动方面发挥着重要作用。课题组前期研究发现,针刺IBS-D模型大鼠足三里、太冲穴,能抑制回肠SS、VIP、P物质的分泌。本实验在前期研究的基础上采用慢性温和应激联合孤养法加灌服番泻叶刺激大鼠造成IBS-D模型,通过观察针刺足三里、太冲穴对IBS-D大鼠腹泻指数及血液和回肠、直肠组织中VIP和NPY表达的影响,以期为临床上使用该针刺疗法治疗IBS-D提供充分的科学理论和实验依据。

1实验材料

1.1实验动物

健康SD大鼠50只,雌雄各半,体重200~250g,湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供(SCXK2009-004)。

1.2ypharma公司

匹维溴铵,50mg/片(solvaypharma公司,批号:611243)。番泻叶,购于湖南省药材公司,经湖南中医药大学药剂科鉴定为真品。

1.3实验设备

96TVIP、NPY酶联免疫试剂盒(上海沪峰生物科技有限公司);分析天平(AY120);低温离心机(湘仪实验设备有限公司);低温冰箱(日本三洋);三用电热恒温水温箱(上海跃进医疗器械厂);酶标仪(美国伯腾仪器有限公司);安迪牌无菌针灸针,0.25mm×25mm(贵州安迪药械有限公司,标准号:GB2024-94);大鼠固定板(湖南中医药大学针灸实验室提供)。

2实验方法

2.1模型评价与检测

将大鼠随机分为空白组和造模组(1∶4),除空白组外,各组均予浓度为2g/mL的番泻叶水煎剂灌胃。灌胃0.5h后,用慢性温和束缚应激加孤养法刺激大鼠。每日随机对大鼠做以下1项处理,前后2d的处理不同:(1)用漆包线捆绑住大鼠的双后肢,使之不能正常活动,造成一定应激刺激,每次持续2h;(2)夹尾1min;(3)45℃高温环境5min;(4)4℃冰水游泳3min;(5)昼夜颠倒;(6)禁食24h;(7)电热恒温振荡水槽水平振荡(160次/min)45min。共刺激14d。模型评价:检测腹泻指数,造模组与空白组比差异具有统计学意义证明模型成功。用Excel随机函数“Rand”将造模组随机意义模型组、捆绑组、针刺组、药物组,每组10只,单笼喂养。

2.2灌胃灌胃,灌胃去药

匹维溴铵片,研磨后用蒸馏水溶解,按大鼠与成人体表面积换算配制成浓度为0.3mg/mL的溶液,灌胃给药,给药体积10mL/kg。

2.3穴位定位方法

造模结束后,空白组、模型组、捆绑组和针刺组灌胃生理盐水,药物组灌服匹维溴铵溶液。针刺组给予针刺相应穴位,捆绑组在与针刺组同等条件和相应时间点给予同样的捆绑刺激。针刺组每日施针1次,连续14d。穴位定位依据:参照《实验针灸学》“实验动物常用腧穴简表”定位。“足三里”穴:后肢关节下腓骨头内侧5mm处;“太冲”穴:后肢足背第1、第2趾骨间凹陷处。直刺5mm。捻转针法:固定大鼠四肢和头尾,将腧穴按常规皮肤消毒,施针者以左手食指或拇指切按准穴位,右手持针垂直刺入穴位内。得气后,用均匀的指力施捻转补泻手法。“足三里”穴行捻转补法:向心角度捻转,幅度90°左右,频率120次/min。“太冲”穴行捻转泻法:离心角度捻转,幅度180°左右,频率60次/min。每穴操作3min,留针30min。

2.4观测指标和检测方法

2.4.1腹泻指数的测定

2.4.2大鼠回血单次采血法

在治疗第14d后,各组大鼠禁食但不禁水16h,腹腔注射0.3mL/100g新配制的10%水合氯醛。麻醉后腹主动脉插EDTA管采血,将分离出的血浆置于冰箱中-20℃保存备用。采血后,取大鼠回盲部以上约5cm处一小段回肠组织及肛门以上约2cm处一小段直肠组织,立即生理盐水冲洗干净,无菌滤纸吸干后精密称重,充分匀浆后低温离心,将分离出的上清液置于冰箱中-20℃保存备用。VIP和NPY的含量严格按照试剂盒说明书方法测定。

2.5两组各层次比较用配对t、q检验,显著显著性统计学处理。多元组比较分

所有数据均用SPSS16.0软件分析处理,计量资料以表示,符合正态和方差齐性者,组内前后比较用配对t检验,多组比较采用单因素方差分析q检验,P0.05即认为差异有统计学意义,P0.01则认为差异有显著性统计学意义。方差不齐时采用DunnettT3检验,如数据经转换后仍不满足方差分析条件,则采用秩和检