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土荆皮中土荆皮乙酸含量的薄层扫描法测定

土景松是松科植物的金钱松。它是根皮或附近根皮。它是《中华人民共和国药典》记载的常用中药。它对寄生虫和瘙痒也很有效。它经常被用来治疗伤口。其制剂有土荆皮酊、复方土荆皮酊、复方土荆皮涂膜剂等。因此,对土荆皮药材进行质量监控非常必要。土荆皮的抗真菌有效成分为土荆皮酸,为一混合物,其中土荆皮乙酸含量最高,可将土荆皮乙酸的含量作为控制土荆皮药材质量的指标。本实验采用薄层扫描法测定了西安地区药材市场出售的土荆皮中土荆皮乙酸的含量,建立了土荆皮药材中土荆皮乙酸含量的薄层扫描法测定方法。

1药品物理成分分析

CAMAGTLCSCANER3薄层扫描仪(瑞士),定量毛细管(瑞士),土荆皮乙酸对照品(中国药品生物制品检定所),所用试剂均为分析纯。土荆皮样品于2000—2001年分批购自西安药材市场与省市药材公司。

2实验方法

2.1供试品溶液的制备

精密称取药材样品粗粉2g,置50mL具塞三角瓶中,加苯20mL,称重,超声提取30min,补加氯仿至原重,密封,放置24h,精密吸取上清液10mL,浓缩至小体积,转移至1mL量瓶中,加苯至刻度,作供试品溶液。

2.2对照溶液的制备

精密称取土荆皮乙酸对照品2mg于2mL量瓶中,加苯制成1mg/mL的溶液,作为对照品溶液。

2.3工作原理

用定量毛细管点样于硅胶GCMC-Na薄层板上(厚0.5mm),展开剂:乙醚-石油醚(8∶2),茴香醛试液为显色剂,100℃烘约10min显色,最大吸收波长λmax=540nm,单波长反射式线性扫描,狭缝8mm×0.9mm。薄层色谱图见图1。

2.4标准曲线及方法

精密吸取对照品溶液2,4,6,8,10,12,14μL点于同一硅胶G薄层板上,按上述薄层色谱条件展开,取出晾干,显色,扫描测定。以峰面积(Y)为纵坐标,对照品量(X)为横坐标得回归方程Y=1609.2X+2790.0,r=0.9984。结果表明土荆皮乙酸2～12μg线性关系良好。

2.5土荆皮乙酸稳定测定

精密吸取土荆皮乙酸对照品溶液5mL,点于硅胶G薄层板上,依法每隔30min扫描测定1次,RSD=2.17%(n=5),结果表明土荆皮乙酸于2h内稳定。

2.6精密度测试

2.6.1rsd测定

精密吸取2号样品溶液10μL,对照品溶液5,10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,按上述方法测定,RSD=2.88%(n=5)。

2.6.2rsd测定

精密吸取2号样品溶液10μL,对照品溶液5,10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,按上述方法测定,RSD=3.50%(n=5)。

2.7供试品溶液配制

精密称取2号样品粗粉2g,共5份,按上述供试品溶液制备方法处理,得供试品溶液。分别吸取上述溶液10μL,对照品溶液5,10μL,点于同一硅胶G薄层板上,按上述薄层色谱条件展开,显色,扫描计算,RSD=2.31%(n=5),表明方法重现性良好。

2.8土荆皮乙酸对照品溶液

精密称取土荆皮粗粉10g,加苯100mL,按上述供试品溶液制备方法提取,精密吸取提取液10mL,共取5份,分别加入土荆皮乙酸对照品2mg,浓缩,定容于1mL量瓶中。精密吸取上述溶液各10μL,点于同一硅胶G薄层板上,按上述薄层色谱条件展开,显色,扫描计算,平均回收率为101.4%,RSD=4.22%(n=5),结果回收率较好。

2.9样品测定

精密吸取供试品溶液10μL,对照品溶液5,10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,按上述条件展开,测定,结果见表1。

3土荆皮实际作用品目测定

3.12000—2002年从西安地区药材市场及省、市药材公司购得土荆皮药材样品共16批,经性状及薄层色谱法鉴定,其中有10批外观性状与《中华人民共和国药典》2000年版描述相同并含有土荆皮乙酸,可判定为正品;另有6批性状与《中华人民共和国药典》有明显差异且不含土荆皮乙酸,可断定为伪品。表明目前市场上土荆皮药材伪品较多,对其进行薄层鉴别并控制土荆皮乙酸的含量,对保证用药正确,保证疗效有重要意义。

3.2实验表明,该法简便、准确、实用,不仅可作为测定土荆皮药材中土荆皮乙酸含量的方法,也可作为鉴定土荆皮真伪的方法。

3.3显色剂曾选用碘蒸气显色,干扰大且易褪色;选用香草醛硫酸试液显色,背景色深干扰大;选用茴香醛试液显色较好。展开剂中加少许醋酸,可克服斑点拖尾。