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一测多评法同步测定复方土荆皮酊中3种二类成分

复方土黄酮是经军队医疗机构制剂规范》批准的中药复方制剂。同时，它被列入《卫生部药物标准》第13卷。它具有抗表皮细菌和止痒等作用。临床上常用于治疗手癣、脚虱和体虱。中药多成分、多功效、多靶点的特点决定着单一成分难以全面控制其质量,以2010年版《中国药典》为代表的质量标准已经向多指标成分、药效成分研究的方向发展,并逐步为国际上所认可的质量控制模式。一测多评法多指标成分同步控制的模式已在多种中药和中成药中得到了应用,一方面可以解决对照品供应相对不足的难题,另一方面也可以为科研和监管提供参考。本文应用一测多评法实现了复方土荆皮酊的多指标质量控制,以价廉易得的土荆皮乙酸为内参物,建立其与土荆皮乙酸-O-β-D-葡萄糖苷和土荆皮丙酸的相对校正因子进行含量计算,并与常规的外标法进行了对比。

1药品、试剂与仪器

Agilent1200高效液相色谱仪(包括低压梯度四元泵G1311A、自动进样器G1329A、恒温箱G1316A、DAD检测器G1315D和脱气机G1322A、ChemStation色谱工作站,美国安捷伦科技有限公司),Agilent1100高效液相色谱仪(包括低压梯度四元泵G1311A、自动进样器G1313A、恒温箱G1316A、VWD检测器G1314A和脱气机G1322A、ChemStation色谱工作站,美国安捷伦科技有限公司),ShimadzuLC-20A高效液相色谱系统(高压梯度二元泵LC-20AB、自动进样器SIL-20A、SPD-M20A二极管阵列检测器和脱气机DGU-20A3、LCSolution色谱工作站,日本岛津公司),MettlerToledoAG285型电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

苯甲酸(批号100419-200301)、水杨酸(批号100106-201104,含量99.9%)、土荆皮乙酸对照品(批号110880-201003,含量99.1%)均购自中国药品生物制品检定所。土荆皮乙酸-O-β-D-葡萄糖苷对照品(批号101224)和土荆皮丙酸对照品(批号101223)均购自四川成都普瑞法科技开发有限公司。市售的4个厂家共17批次的复方土荆皮酊,A,B,C厂各1批次,D厂14批次。乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。

2测定组分f

在一定范围(线性范围)内成分的量(质量或浓度)与检测器响应成正比,即W=f·A,可得响应因子f=WAf=WA。在多指标质量评价时,以药材中某一典型有效组分(有对照品供应者)为内参物(s),建立该组分与其他组分(i)之间的相对校正因子,然后通过校正因子计算其他组分的含量。RCFsi=fsfi=Ws?AiAs?WiRCFsi=fsfi=Ws?AiAs?Wi

2.2土荆皮提取物的测定

AgilentZorbaxSBC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.09%甲酸(B)水溶液,梯度洗脱(0～8min,30%～40%A;8～22min,40%～100%A),柱温35℃,流速1.0mL·min-1,检测波长262nm,进样量10μL。在此色谱条件下,土荆皮乙酸-O-β-D-葡萄糖苷、土荆皮丙酸、土荆皮乙酸和土荆皮甲酸与其他相邻色谱峰的分离度均良好,阴性对照无干扰,见图1。

取土荆皮乙酸-O-β-D-葡萄糖苷、土荆皮丙酸和土荆皮乙酸的对照品适量,精密称定,分别置于50mL量瓶中,加甲醇配制成单一对照品储备液(质量浓度分别为231.965,84.402,368.652mg·L-1)。精密量取各对照品储备液适量至同一量瓶中,制成含土荆皮乙酸-O-β-D-葡萄糖苷、土荆皮丙酸和土荆皮乙酸分别为81.223,13.504,73.730mg·L-1的混合对照品溶液。

精密量取复方土荆皮酊样品5.0mL置于10mL量瓶中,用60%甲醇定容至刻度,摇匀,用0.45μm的微孔滤膜过滤,即得。

按处方比例和工艺制备不含土荆皮药材的阴性样品,按2.2.3项下方法制成阴性对照溶液。

分别精密吸取上述对照品储备液适量,置于10mL量瓶中,用甲醇配制成含土荆皮乙酸-O-β-D-葡萄糖苷为11.598～82.845mg·L-1,土荆皮丙酸为1.206～27.009mg·L-1,土荆皮乙酸为14.746～126.392mg·L-1的混合对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液10μL按2.2.1项下色谱条件依次进样分析。以质量浓度X(mg·L-1)为横坐标,峰面积积分值Y为纵坐标,绘制标准曲线,土荆皮乙酸-O-β-D-葡萄糖苷、土荆皮丙酸和土荆皮乙酸的线性方程分别为Y=27.036X-2.1016(r=0.9998),Y=46.889X+6.1