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caspase3在土荆皮酸诱导卵巢癌skov3细胞凋亡中的作用

从荆皮酸（pseudolicacidb，pab）中提取的二氧化合物可诱导各种肿瘤细胞的死亡。细胞凋亡是凋亡抑制基因和促进基因相互作用的结果。Bcl-2是一种凋亡抑制因子,Caspase3家族则在凋亡通路上产生终末效应事件,使凋亡最终得以完成。这两种基因在PAB诱导卵巢肿瘤凋亡过程中如何变化目前尚无明确结论。该研究从细胞凋亡角度探讨PAB对人宫颈癌细胞的作用及对Bcl-2和Caspase3蛋白表达的影响,为PAB用于卵巢癌治疗及探讨其机制提供实验依据。

1数据和方法

1.1目标

按常规贴壁培养卵巢癌SKOV3细胞株,取细胞活性大于98%的细胞进行实验。

1.2大鼠抗bl-2、caspase3的表达

土荆皮酸(PAB)购自哈尔滨弘博生物科技有限公司,分子量为432.5,应用时以RPMI-1640培养液稀释;鼠抗人Bcl-2、Caspase3单克隆抗体购自美国SantaCruz公司;Caspase3活性检测试剂盒购自晶美公司(深圳)。

1.3方法

1.3.1清洗固定固定

将PAB处理后的细胞,制成l×105/ml单细胞悬液,清洗,固定。加入200μ1RNaseA(1g/L),37℃水浴30min,再加PI染色液避光反应30min,应用Multicycle软件分析亚二倍体峰。

1.3.2蛋白凝胶的测定

3将PAB处理后的SKOV3细胞经洗涤、离心后,加入预冷的细胞裂解液0.1ml裂解,离心。取上清液测定蛋白含量。分别取各组蛋白依次电泳、转膜、封闭。分别加抗Bcl-2、Caspase3(内参照β-actin抗体)在4℃下孵育,漂洗,再用二抗(辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG)震荡孵育2h,滴加发光剂,X线曝光显影,扫描各蛋白条带的含量,重复3次,取均值。

1.3.3casp第三年活性测试

采用ActiveCaspase3ApoptosisKit检测Caspase3活化情况,按试剂盒说明操作。

1.4统计方法

采用SPSS11.5统计软件进行t检验分析。

2结果

2.1细胞周期分布的改变

不同浓度PAB作用24h后,呈浓度依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G0/G1期的细胞比例,另一方面增高G2/M期细胞的比例,见附表。

2.2pab的诱导凋亡

在DNA图谱G0/G1期前出现一个代表凋亡细胞的亚G1峰。对亚G1峰进行定量分析表明,不同浓度(2.5,5,10,20μmol/L)的PAB作用于SKOV3细胞24h后均显示亚G1峰,PAB呈剂量依赖性方式诱导其凋亡,其凋亡率分别为(11.26±1.23)%、(24.52±2.18)%、(43.22±3.27)%、(56.50±4.18)%,对照组无凋亡峰,两组比较差异有统计学意义(P0.01)。

2.3不同促进剂用量对面包品质的影响

3蛋白表达的影响经不同浓度(2.5,5,10,20μmol/L)PAB处理SKOV3细胞24h后,Bcl-2蛋白表达逐渐下降,OD值分别为:(13140.38±124.20),(10298.32±104.54),(8417.44±85.60),(6247.72±71.68),(4735.48±60.69),差异有统计学意义(P0.05);Caspase3蛋白表达上调,OD值分别为(70.15±5.90),(120.84±10.65),(157.34±12.7),(198.37±16.79),(237.66±18.64),差异有统计学意义(P0.01)。

2.4caspase3的表达

3活性的影响不同浓度(2.5,5,10,20μmol/L)PAB处理SKOV3细胞24h后,表达活化Caspase3的细胞百分率分别为(4.2±0.36)%、(12.58±0.64)%、(26.77±0.84)%、(45.54±1.18)%、(67.08±1.49)%,随着PAB浓度的增高,Caspase3活化百分率增高,呈剂量依赖性(P0.01)。

3pab诱导skov3细胞凋亡

PAB对多种人类肿瘤有抑制增殖和诱导凋亡的作用。该研究结果表明,PAB处理SKOV3细胞后在DNA图谱G0/G1期前出现一个代表细胞凋亡的亚G1峰,呈剂量依赖性诱导细胞发生凋亡,表明PAB对卵巢癌SKOV3细胞有凋亡诱导作用。Bcl-2是主要的抗凋亡和促凋亡调节因子,通过调节线粒体功能来调节凋亡,该