三七总皂苷复方脂质体凝胶剂的制备及体外透皮吸收研究.docxVIP

三七总皂苷复方脂质体凝胶剂的制备及体外透皮吸收研究

三七：又名巴氏合金（b.h.chen），是五加科人参科的一种，分布于中国云南和广东。从那里提取的三七糖（pns）可以提取。主要成分是人参糖苷rg1和rb1，它可以促进皮肤的代谢，充分发挥血液循环，抗衰老、润肤，达到改善皮肤和增白剂的效果。云南地方草本植物露水草(Cyanotisarachnoidea)提取物β-蜕皮激素(β-ecdysone,EDS)含有能增强细胞新陈代谢及活化的有效物质,可促进细胞生长,刺激真皮细胞分裂,具有良好的去角质、去斑增白作用。将PNS与露水草提取物组合成复方制剂,可更好地发挥抗皮肤衰老的功效。

脂质体(liposomes)属新型胶体给药系统,具有良好的生物相容性,不仅可以很好地与皮肤表面接触,而且可以透过表皮层深入到皮肤深层,增加药物在皮肤局部的积累,发挥缓释作用。凝胶剂是一类含有溶解、混悬或乳液状态药物的半固体制剂,能在较长时间内与作用部位紧密黏附,具有较好的生物黏附性,并且制备简单、使用舒适。

目前临床PNS类的药物制剂大多为常规口服剂型和注射剂,对于以抗衰老为目的的皮肤外用制剂报道很少。并且作为局部外用制剂,具有一定的黏度和触变性是非常必要的,单纯的脂质体缺乏这些性质,需加入一些凝胶剂或增稠剂。所以,我们旨在制备一种含有PNS的复方脂质体凝胶,以提高药物在皮肤中的滞留量,更好地发挥其抗衰老作用。

1材料和方法

1.1高效液相色谱法

HypersilODS色谱柱(200mm×4.6mm,5μm,大连依利特科学仪器有限公司);LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津);ZTY智能透皮试验仪(巩义市英峪予华仪器厂);电子分析天平(METTLERAE200);SHB-3循环水式多用真空泵(河南太康教材仪器厂);电热恒温真空干燥箱(上海跃进医疗器械厂);2XZ-4型旋片式真空泵(上海双鹅制冷设备有限公司监制);AnkeTGL-16C型离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2仪器:天然药物eds

PNS(昆明制药集团药物研究所,批号041012);人参皂苷Rg1化学对照品(中国药品生物制品检定所,批号041008);EDS(云南玉溪万方天然药物有限公司,批号040707);乙腈(美国BurdickJackson公司);甲醇(江苏汉邦科技有限公司);胆固醇(中国医药集团上海化学试剂公司);大豆磷脂(PC含量90%,上海太伟药业有限公司);卡波姆-934,卡波姆-940(TheBFGoodrichCompany);所用水为三蒸水。

1.3动物

SD大鼠,早,体重(200±10)g(复旦大学实验动物科学部)。

1.4检测波长和检测波长

流动相:Rg1为乙腈:20mmol磷酸二氢钠=25:75(V/V),检测波长203nm,进样量20μL;EDS为乙腈:去离子水=15:85(V/V),检测波长242nm,其余条件同Rg1。

1.5标准曲线的制备

1.5.1标准曲线的绘制

精密称取Rg1对照品10mg于50mL棕色容量瓶中,用50%甲醇定容,摇匀,分别稀释成4、10、40、80、120mg·L-1的标准溶液,进样20μL,以峰面积(Y)对Rg1标准溶液浓度(X)进行线性回归,得方程:Y=1343.7X-660.5,R2=0.99999,线性范围4～120mg·L-1。

1.5.2标准曲线的线性回归

精密称取EDS对照品1.0mg于50mL棕色容量瓶中,95%乙醇定容,摇匀。分别稀释成0.4、1.0、4.0、8.0、12.0mg·L-1的标准溶液,进样20μL,以峰面积(Y)对标准溶液浓度(X)进行线性回归,得方程:Y=14967X-823.28,R2=0.9999,线性范围0.4～12mg·L-1。

1.6脂质体制备

1.6.1大豆外施中药比对大豆包封率的影响

对影响脂质体包封率的各因素进行考察,结果表明,卵磷脂与胆固醇的用量比、药物浓度和脂药比是影响包封率的主要因素,因此对三者进行正交实验分析以筛选出较优处方。按较优处方定量称取大豆卵磷脂,胆固醇于茄形瓶中,加无水乙醚溶解,减压旋转蒸发除去有机溶剂,并真空干燥过夜,除去残留有机溶剂。用含有处方量药物的水溶液水化,得乳白色脂质体溶液。

1.7脂质凝胶剂的制备和配方筛选

1.7.1空白凝胶基质

称取一定量的卡波姆-934于烧杯中,加入少量蒸馏水放置过夜,使之溶胀,溶解。加2mol·L-1氢氧化钠溶液适量调节pH在6～7之间,得无色透明的空白凝胶基质。将处方量的脂质体适量与空白凝胶基质研和均匀,得脂质体凝胶,使PNS含量为2%,EDS的含量为0.15%。

1.7.2岩肉胶凝液的制备

取体重合格的♀SD大鼠,用20%的乌拉坦腹腔注射麻醉后剪去背部毛,剥