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液 相 色 谱;;;4、高效液相色谱仪通常在室温下操作，样品一般不须预处理，操作简便，很容易掌握。

5、高效液相色谱操作的难点在于流动相的选择。可以采用纯溶剂，二元或多元混合溶剂作流动相。但流动相的选择必须遵循一定的规律，并以科学的方法优选。

6、高效液相色谱技术也存在一些问题。柱子价格昂贵，要消耗大量的溶剂，而且许多溶剂对人体是有害的。高效液相色谱仪的价格和损耗也比气相色谱仪高。此外，尚缺少象气相色谱中氢火焰离子化检测器那样的通用型、高灵敏度的检测手段。因此，高效液相色谱无论在技术上，在理论上，还是在应用上都处于发展阶段。;;1、输液系统

输液系统的作用是向柱子提供压力高，流速稳定的流动相。它以高压输液泵为核心，由溶剂储槽、过滤器、输液泵、梯度溶剂混合器等组成。为了测量系统流量和压力，在输液系统的输出通路上还安装了不同类型的传感元件。

①储液槽

储液槽是盛装溶剂的容器。它可以是一个普通的溶剂瓶，或是一个专门设计的储液槽，用于除去溶剂中的气体。

②过滤器

各种泵的柱塞、进样阀的阀芯加工的精密度都非常高，微小的机械杂质将导致这些部件的损坏，而不能很好的工作。同时杂质在柱头的积累还影响柱子的使用，增大柱压，因此过滤溶剂，设置过滤器是必须的。

过滤器的芯子通常是一个由多孔聚四氟乙烯制成的具有一定空隙度的圆柱体，镶嵌在一个不锈钢的壳体中，形成一个完整的、安装方便的部件。;③高压输液泵

高压输液泵是现代液相色谱装置中最关键的设备，输出高压溶剂是实现快速分析的前提。除了最高使用压力外，还有线性流量范围，输出流量的精确度，泵的操作方式，流量输出或压力恒定的稳定性，以及易于操作和维修等。

高效液相色谱仪中所用的泵可分为两类：恒压泵和恒流泵。恒压泵主要指气动放大泵，泵出口压力在系统中是恒定的，流速由柱的阻力决定。恒流泵有往复泵和注射泵，这类泵输出的溶剂流量恒定，柱前的压力由柱后的阻力确定。目前使用最多的是往复泵。;④梯度洗脱装置

当样品是一个含有不同种类组分的复杂混合物时，通常用一种纯的???固定组成的混合溶剂难以实现满意的分离，往往是先溜出来的峰分不开，而后溜出来的峰保留时间太长。因此，在液相色谱中常在一个样品的分析过程中，不断调整混合溶剂的组成，改变溶剂强度或溶剂的选择性。如果溶剂组成随洗馏时间按一定规律变化，称这种洗馏过程为梯度洗脱。梯度洗脱过程溶剂组成的变化可以是线性的，也可以是非线性的；可以是二元的，也可以是三元，甚至多元溶剂的混合。梯度洗脱装置根据溶剂混合时的压力分为两种类型：低压梯度和高压梯度。;低压梯度是溶剂在常压下混合，然后用一个高压输液泵把它输送至柱系统中。多元溶剂在混合室或溶剂罐中混合，并以一定速度改变溶剂的组成。这种方式简单、经济，只能用往复泵。高压梯度使用两台高压输液泵，每台输送一种溶剂，两台泵输出的溶剂在一个混合室内混合。每台泵的溶剂流量由独立的电路或计算机控制，它们按一定比例改变。

对于梯度系统系统来说，关键是要保证流速的稳定，梯度洗脱洗脱重现性好。因此混合室的体积应尽可能地小，且不存在死角。;进样装置

在液相色谱中，进样方式有微量注射器进样，进样阀进样，自动进样装置等。高效液相色谱最主要的特点要求进样器设计要耐高压，死体积小，与溶剂接触的部分具有很好的耐蚀性。

进样口处的隔垫把系统和外界分开。为了使隔垫能承受上百公斤的压力，顶盖的通孔很细，而且长。在系统处于高压时，用一根金属棒压住隔垫的通孔部分，避免内部压力太大把隔垫冲破。液相色谱的进样口目前大部分都是采用六通阀，六通阀进样的原理如图所示。;进样时样品中不应混入杂质。溶解样品的溶剂最好和使用的流动相一致，以防止溶剂变化出现不溶物而堵塞柱子。;检测器

检测器在色谱系统中非常重要。因为液相色谱系统的所有特性都通过检测器的输出信号表现出来。目前液相色谱仪常备的检测器主要是紫外分光光度计和光二极管阵列检测器，示差折光仪，荧光检测器。紫外和示差折光检测器是液相色谱最基本的检测器，下面介绍这两种检测器的工作原理。;紫外、可见－紫外分光检测器

这种检测器在液相色谱中应用最广。几乎是一切色谱仪必备的检测器，它的特点是：噪音低、具有相对高的灵敏度、结构简单、易于维修。紫外检测器的工作原理是：当一束紫外光通过样品池时，入射光的一部分被溶液中的某种物质吸收，吸收的多少取决于溶质的性质。溶质的浓度和响应值之间存在线性关系。紫外检测器有固定波长检测器，可变波长检测器两种。可变波长检测器采用氘灯或氘灯与钨丝组合的光源，波长在190～800nm范围可调。;示差折光检测器

示差检测器的工作原理每一种物质在一定的温度、压力等条件下都有固定的折光指数。样品组分从柱中洗馏出来与流动相组成一混合物，它的折光指数与纯流动相或纯溶质都不相同。示差折光检测器就是以纯溶剂作参照物，连续监测柱后洗馏物折