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结直肠癌KRAS基因突变检测专家共识

卫生部病理质控与评价中心结直肠癌KRAS基因突变检测专家组

全球结直肠癌每年新发病例数约120万，年病死人数超1．组织获取：所有标本进行基因突变检测前均先行常规

过60万，发病率居第3位，病死率居第4位…。近些年，结病理检查和诊断(HE染色)，必须经有经验的病理医师确定

直肠癌的发病率呈明显上升趋势…。因此，结直肠癌的治疗健康肿瘤细胞的百分比(肿瘤细胞／整张切片所有细胞，估

一直是国内外学者研究的热点。随着靶向治疗药物表皮生算)，必要时应采取富集肿瘤细胞的方法，如手工刮取

长因子受体(EGFR)抑制剂西妥昔单抗(Cetuximab)和帕尼(macrodissection)或显微切割法(microdissection)。选取以肿

单抗(Panitumumab)的问世，结直肠癌的治疗进入了靶向治瘤细胞为主的、没有明显的坏死、黏液和炎性改变的组织进

疗时代。行检测。肿瘤细胞数量要求尚无统一标准，至少应有100个

多个大样本、多中心Ⅲ期临床研究结果提示，KRAS基肿瘤细胞，具体视所用DNA提取方法和突变检测方法的敏

因第2号外显子第12、l3位密码子的突变状态与阻断EGFR感度等而定。

的单克隆抗体——西妥昔单抗、帕尼单抗的疗效明确相关，2．DNA提取：DNA的质量很重要，一定要按标准的操作

KRAS野生型的患者可以从西妥昔单抗和帕尼单抗的治疗程序提取DNA，并进行严格的质控。目前没有统一的标准

中获得最大化的生存效益，从此结直肠癌的治疗揭开了个体方法，对于手术标本，可采用常规的商品化DNA提取试剂

化治疗的新篇章。早在2009年，美国临床肿瘤学会盒。对于活检标本，推荐使用能提取石蜡包埋组织微量

(ASCO)即建议对于转移性结直肠癌患者，在选择抗EGFRDNA的试剂盒。提取的DNA建议先测定浓度，并进行质量

的单抗药物(西妥昔单抗或帕尼单抗)治疗前应检测KRAS评估后再用于基因突变检测。

基因状态_6。美国《国家综合癌症网络(NCCN)结直肠癌3．突变检测方法：方法很多，目前没有统一标准，各实验

临床实践指南》(2011年)也指出，使用西妥昔单抗或帕尼单室可以根据实际情况选择应用，同时应充分了解所用检测方

抗的患者应检测肿瘤KRAS基因突变状态。中国卫生部颁法的优缺点及局限性。所有方法建立前应进行有效性验证。

布的《结直肠癌诊疗规范(2010年版)》中推荐西妥昔单抗用表1中列出了KRAS基因常见的突变类型。

于治疗KRAS基因状态野生型患者。

目前有关KRAS基因突变的检测方法很多，参与检表1KRAS基因常见突变类型

测的机构众多，缺乏统一的标准，本文旨在就现有的KRAS

的检测流程以及常用检测方法给予简要介绍和评价，为临床

病理工作提供指导。

一、检测标本

1．标本类型：(1)手术切除的标本：新鲜组织和(或)石

蜡包埋组织；(2)肠镜等活检标本；手术切除标本及活检标

本均具有的病例，建议用手术切除标本进行检测；(3)血液：

应用血液标本进行检测目前尚处于研究阶段，不推荐应用。

2．标本处理：(1)新鲜组织直接提取DNA。(2)石蜡包(1)直接测序(directsequencing)法：是目前应用最多的

埋组织的标本处理：所有标本离体后及时进行标记、切开、固一种检测方法，主要是Sanger测序法。其基本原理是进行

定等处理。应用新鲜配制的4％中性甲醛缓冲液固定标本，DNA合成反应时，正常掺入dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTYP)

避免使用Bouin液等含重金属离子的固定液。固定液的量会使DNA链延伸，如果掺人dideoxyNTP(ddNTP)，则会使

应至少为组织体积的10倍。活检标本固定6～12h，手术标DNA链延伸终止。DNA片段是荧光标