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鸡胚成纤维细胞的制备

一、 材料和试剂

1、 鸡胚：9-10日龄发育良好的SPF胚

2、 试剂：0.25%胰酶，MEM培养基，新生牛血清，1万IU双抗，3%谷氨酰胺，7.5%碳酸氢钠

3、 仪器和器材：，带6-8层纱布的100ml烧杯两个，直径9cm的平皿两个，中号镊子四把，倒置显微镜，培养箱，50ml细胞培养瓶，10ml刻度吸管两根、5ml刻度吸管，250ml生理盐水瓶两个，无菌的细胞培养瓶，灭菌好的PBS，酒精棉球，废液缸等

二、 操作步骤

1、 操作前的准备：

①预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37°C水浴锅内预热。

⑵用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

0正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。

0点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

0准备好将要使用的消毒后的培养瓶。

0取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

2、 成纤维细胞制备：

将选好的9-10日龄的发育良好的SPF胚用5%的碘棉消毒蛋壳气室部位，再用酒精棉脱碘。

无菌取出鸡胚，放入灭菌的玻璃皿内，用PH7.2的PBS冲洗一次，去头，四肢和内脏。

再用PH7.2的PBS冲洗两次。

用镊子捏成小块（2-3mm3）,用PH7.2的PBS冲洗两次。

鸡胚约加4ml0.25%胰酶溶液，38