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乳 清 蛋 白 质 检 测 方 法

乳品中蛋白质淜定常用方法有凯氏定氮法和分光光厅法、双缩睬法、福林苯酚法及考马斯爽兰比色祛等，气凯氏定氮法昆先将蛋白食品加热消化分韶使舞与硫酸结合得到硫梭桉，用两定让，录后通过换贺定带蛋白质凸凯氏定氮让所淜蛋白质为食品总蛋白质含帛（蛋白组和非蛋白氝之和）？凯氏定组法是广泛被认可的检测蛋自质服可信的方法，用丁检测各种食品中蛋自(i9]心分光光度法足近年来逐渐应用在蛋臼检测巾的方法．，其原理也是先将蛋自消化得到硫酸饺，通过与显色剂作用得到吐唗类化合物，在40·0.nLn液长下侧吸光度，与标准比较再换算定币蛋白。

考马斯亮兰比色法是在l976年，．布拉脸福德等人提出的一种做吊蛋白质检测的方止，它是在酘性条仵卜-P考马斯壳兰中的疏水压凶与蛋白质中吮水区域之闺发生疏水相互作用力而结合产生一种染色复合物使溶液变为蓝色书其姬人吸收波长变为595nm十且在一定蛋白质含杲范围内蛋白质－考马斯亮兰复合物在最大吸收波长处的吸光度与蛋白质含泉符合朗贝比尔定律阳］，因而可用千蛋白质含帛分祈心此法检浏快速飞高灵敏度和操作简单及成本低，但近年来人们对考乃斯亮兰与牛血清蛋白虳反应机理研究发现配翌显色液的乙醇浓度·｀磷酸盐浓度·、甘含带、NaCl含院等会影响吸收光谱，如显色液中磷酘盐偏商，其蛋自染色复合物的吸收波K会降低；NaCl含帛增加，染色复合物的吸收波长也会降低等，理论上这种染色复合物的垃大吸收波长在590~600nm。因此卜在配置显色剂的乙踪、啋酸等试剂颍

—定时，需要选择合适的割定波长，使得测定方法有较高的灵敏度，判定伯更接近具伯伈1砬］凸

以十儿种蛋白测屉方法都只能检淜乳消液中的总蛋白质书不能检测乳清中不同的蛋白质种类书即不能梒淜单一蛋白凸蛋白质种类定悍柏测最常用的方祛是电沐祛伊目前电泳祛虽没有将乳洘中所有蛋白或多肤都分离检测出来生但已有文献表明电泳i么能将乳球蛋白和乳白蛋白很好的进行分离俨且结果良好...方法简单勺电

泳条带颜色深戏与蛋白含展之间有线性关系，条带颜色越深表明蛋白含带越高，因此可用千探究屯泳法泪l罚乳清液中乳球蛋臼和乳自蛋臼含启心

本文探讨考马肵壳兰比色法、分光光度法测乳洁中的蛋白质含飞绪果与凯氏定氮法进行比较：用SDS-PAGE凝胶电泳法结合凝胶成像仪分析乳消蛋白分子府，检测乳渚中含吊最大的两种蛋白质（a乳白蛋白和贮乳球蛋白）含箭。

考马斯壳兰CG250)，因药集团化学试剂有限公司：

乳消 ，山东省农科院兴牛乳＼化有限公司，马苏干酪副产物：

丹麦阿拉浓缩乳清蛋白粉(WPC80.蛋白质含骨78.50%），上沥诺申食品有限公

司·

牛血清白蛋白(BSA)标准品，广州浩玛生物科技有限公司．

a－乳白蛋白、6－乳球蛋白标准品．SigmaChemicalCompany.

1.2 仪器与设备

分光光度计(V-1100D) 上海美谱达有限公司

凝胶成像系统仪(LAi1\EID) 北京赛智创业科技有限公司：电泳仪DYY-2C型）北京市六一仪器厂；

电子天平(YP300JN型）上海精密仪器科仪器有限公司．数显恒温水浴锅江苏金坛市金城国盛实验仪器厂．

自动凯氏定氮仪(SKD08S2)上洈沛欧分析仪器中限公司

电热恒溫鼓风干燥箱(DIIG-9l10A型）上洈稍宏实验设备中限公司．其他试验仪器为实验室常用仪器。

试验方法

2.2.1考马斯亮兰比色法

考马斯壳兰0-250溶液的配制：准确称取考马斯亮兰0-250I0.00mg,加入95％乙醇50mL溶解、85％磷酸）OOmL，溶韶充分后用蒸饰水定容至IL于棕色瓶中备用．

蛋白质对照品溶液的配制·准础称取10.00亳克牛血清白蛋白溶于蒸馆水

中并稀释至100ml得到蛋白质对照品溶液浓度为O.lmg/mL,存放在4C冰箱中．

分别吸取蛋白质对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、06、0.8ml于凡寒试管中．分别补加水至lmL再加4mL考乃斯克兰0-250溶液，扭拌均匀井放置IOmin后淜吸光度，从579nm到621nm吸光度淜定频率每隔2nm一次，每组实验分别做二次平行．

2.2.1.4供试品溶液制备：取一定俄浓 缩乳清蛋白粉用蒸馈水溶至100ml 并以300