酶法破碎大肠埃希菌.酶法破碎大肠埃希菌.pptVIP

岗位演练酶法破碎大肠埃希菌1任务二人干扰素α2b发酵液处理

查阅资料，熟悉大肠埃希菌细胞壁的结构及组成。查阅设计《酶法破碎大肠埃希菌操作记录》，在任务实施过程中同步填写。向大肠埃希菌悬浮液，加酶进行细胞破碎；以革兰结晶紫染色后用血球计数板计数，计算破碎率。设计实操设计（一）任务描述2

（二）实训材料1.材料、试剂保藏的大肠埃希菌斜面；溶菌酶；碎冰；胰蛋白陈；酵母提取物；氯化钠；氯化钾；氢氧化钠；磷酸氢二钠；磷酸二氢钾；Tris；浓盐酸：EDTA；TritonnX-100；草酸铵；结晶紫?；95%乙醇；蒸馏水。2.仪器设备酸度计、冷冻离心机、电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温摇床。3

（三）实训操作0504030201配制溶液制备大肠埃希菌料液收集大肠埃希菌酶解大肠埃希菌菌体破碎率检查LB液体培养基PBS缓冲液Tris-HCl缓冲液溶菌酶裂解液革兰结晶紫染液菌种接种于LB液体培养基，以200r/min，37℃过夜培养（或18h）1℃，8000r/min离心10min，取沉淀，用PBS悬浮后，再4℃，反复用PBS洗涤，离心菌体2～3次。每克湿菌体加入10～20mL裂解液，混匀后冰水浴3h。破碎菌体前后分别取样，以革兰结晶紫染色，显微镜观察，计数破碎率。4清场11清场6

（四）任务分析与总结1.为什么能够以酶法破碎大肠埃希菌？除了酶法外，还有哪些方法