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兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISAkit说明书

兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISAkit说明书ELISA试剂盒规格：

规格：96T可以测90个样，5个标准孔，1个空白孔

规格：48T可以测42个样，5个标准孔，1个空白孔

【ELISA试剂盒种属】人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA

试剂盒等。

【试剂盒检测目的】用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血

清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

【标本】血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

【用途】科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。

供应商：上海樊克生物有限公司

供应商：上海樊克生物有限公司

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

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兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISAkit说明书

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠绒毛膜促性腺激素水平。用纯化的小鼠绒毛膜促性腺激素抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胶原酶，再与HRP标记的胶原酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胶原酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠绒毛膜促性腺激素浓度。

兔子免疫球蛋白M（IgM）ELISAkit说明书操作步骤

-标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100以，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50以，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100以分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50以，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50以弃掉，再各取50以分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50皿分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50以，混匀后从第七、第八孔中分别取50以加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50以，混匀后从第九第十孔中各取50以弃掉。

（稀释后各孔加样量都为50以，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。

-加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40以，然后再加待测样品10以（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

-温育：用封板膜封板后置37^温育30分钟。

配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

-洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

-加酶：每孔加入酶标试剂50以，空白孔除外。

-温育：操作同3。

洗涤：操作同5。

显色：每孔先加入显色剂A50gl，再加入显色剂B50gl，轻轻震荡混匀，37^避光显色15分钟.

终止：每孔加终止液50gl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

-测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

兔子免疫球蛋白M（IgM）ELlSAkit说明书Elisa试剂盒操作步骤：

3.温育：用封板膜封板后置37^温育30分钟。

4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

加酶：每孔加入酶标试剂50以1，空白孔除外。

ELISA试剂盒样品的采集和存储

血清-使用血清分离管，使样品在室温下或凝块一夜之间两个小时

在大约1000X4oCG.测定新鲜制备的血清离心20分钟

立即或存放样品在-20°C或稀释后使用80oC。避免反复冻融循环。

血浆采集血浆用EDTA或肝素作为抗凝剂。15分钟，离心样品

1000XG在2到8摄氏度范围内采集30分钟。去除血浆和即刻检测或者储存样品

液体类标本：

包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1） 血清：

室