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场发射透射电镜（TEM）测试制样说明

测试样品范围：

各种材料内部微结构进行观察；

粉末、纳米颗粒形貌和粒径观察选区电子衍射和晶体结构分析；

金属、陶瓷、半导体、塑料、农作物、细胞等显微结构；

配合EDS能谱仪可以对各种元素进行定性和半定量微区分析，元素检测范围：B?U元素。

透射电镜（TEM）测试制样要求：

透射电镜能够观察200nm以下的样品；

对于粉末和液体样品，要求样品均匀分散在支持膜上并且干燥；

块体样品，要求样品大小为直径3mm的圆，厚度为200nm以下；高分辨样品要求厚

度在10nm以下；

含磁样品需要在委托测试单中重点标识，需要特殊处理，否则不予测试；

需要离子减薄的金属、陶瓷样品，需要已预减到150微米以下，否则不予制样和测试。

透射电镜生物样品制备步骤：

取材：组织块小于1立方毫米

固定：2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。

用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次

1%锇酸固定液固定2-3小时

用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次

脱水：

50%乙醇15-20分

70%乙醇15-20分

90%乙醇15-20分

90%乙醇90%丙酮（1：1）15-20分

90%丙酮15-20分

以上在4度冰箱内进行

100%丙酮室温15-20分三次

包埋：

纯丙酮+包埋液（2：1）室温3-4小时

纯丙酮+包埋液（1：2）室温过夜

纯包埋液37度2-3小时

固化：

37度烘箱内过夜

45度烘箱内12小时

60度烘箱内24小时

超薄切片机切片70nm

醋酸铀-柠檬酸铅双染色

负染色的操作方法

用一根细滴吸管吸一滴样品悬液滴在有膜的铜网上，滴样时要防止铜网被液体吸到管上来或翻转而被污染。如果用Formvar膜时，在制好膜后，可以直接在粘于滤纸上的铜网进行负染色操作。如果用碳膜时，要用镊子夹着铜网，滴液后静置数分钟，然后用滤纸从铜网边缘吸去多余的液体，滴上负染色液，染色1?2分钟用滤纸吸去负染色液，再用蒸馏水滴在铜网上洗1?2次，用滤纸吸去水，待干后可用于电镜观察。干燥时，由于表面张力的作用，某些敏感的材料可能受到损伤，可用戊二醛或四氧化锇预固定。预固定在滴样之后进行。

测试相关资料：

如测试样品有相关文献资料，确保一次性达到测试目的。

附：具体标本取材方法

电镜固定液（2.5%中性戊二醛）配方：

TOC\o1-5\h\z戊二醛溶液（市售，浓度为25%）： 10ML

0.2M磷酸缓冲液： 50ML

蒸馏水（或双蒸水）： 40ML

混匀后即配成2.5%中性戊二醛溶液。

注：0.2M磷酸缓冲液：NaH2PO4.2H2O:0.588克；Na2HPO4.12H2O:5.8克；蒸馏水（或双蒸水）：100ML 混匀、溶解后调PH至7.2-7.4即可。

透射电镜：观察各种实体组织或培养细胞等的内部超微结构

细胞，数量要求：106次方以上。生长在培养皿或培养板上细胞取材，若是悬浮的细胞将细胞转移到尖底EP管里直接离心，贴壁细胞就先倒出培养液，用胰蛋白酶消化或用细胞刮刮下，而后带培养液一起低速离心，800-1200转/分钟，离心5-10分钟使细胞沉淀成团，离心完后倒出培养液，沿壁缓慢加入电镜固定液（1.5%-2.5%中性戊二醛），注意不要把细胞团打散。4°C下固定15分钟或以上再送检。若细胞团太小，注意要用1ml甚至0.5ml尖底EP管来进行固定、保存。

肌肉：观察纵切面时沿着肌束方向，用锋利的刀片或剪刀在取出的组织一边取出1-3条细长的肌束，横截面约1mm*1mm，投入到2-8C的电镜固定液（2.5%的中性戊二醛）里。若有条件，为防止肌肉收缩变形，可将取出的肌束贴在载玻片毛玻璃一侧，使其略微伸展。再将贴好标本的载玻片放入戊二醛中进行固定（下面有图示）。若无，则可取出长条状组织后，垂直缓慢放入固定液中，悬空在固定液里稍等3秒再放入。

植物、昆虫等密度比固定液低的样品：必须先用针筒或抽真空仪器先抽气，再使标本沉入固定液中。