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中文摘要

脐带间充质干细胞对高糖环境下肾小管上皮细胞自噬的作用及

相关机制研究

背景：

糖尿病肾病（diabetickidneydisease,DKD）是糖尿病（diabetes

mellitusDMDKD

，）累及微血管后的主要并发症之一，不仅是糖尿

病患者死亡率增高的原因，亦是导致终末期肾脏病（End-stage

disease,ESRD）的主要原因。由于其发病机制众多且复杂，尚不明了，

临床缺乏DKD的特异性治疗手段，因此一旦发展到ESRD的时候，

往往比其他肾脏疾病的治疗更加复杂困难。因此临床上早期发现和识

别DKD，及时防治，对于延缓肾功能进展，改善患者的生活质量和

结局具有重要意义。既往认为DKD是肾小球疾病，研究发现肾小管

间质纤维化是DKD发展至ESRD的主要病理改变，其中肾小管细胞

的上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）在肾小

管间质纤维化的发生与发展过程中起重大作用。且随着研究的深入，

肾小管上皮细胞凋亡及自噬在DKD发生发展中的作用受到重视。

DKD患者体内高糖及能量过剩会抑制自噬，导致细胞出现功能障碍

humanumbilicalcordmesenchymal

及凋亡。人脐带血间充质干细胞（

stemcells,hUCMSCs）是间充质干细胞（mesenchymalstemcells,

MSCs）中的一种，具有高度的多向分化能力，能够分泌多种生长因

子和细胞因子，还具有一定的全身抗炎、免疫抑制、损伤修复、促进

血管生成、防止细胞凋亡作用。研究发现，MSCs可以改善长期处于

高糖环境中肾脏细胞、胰岛自噬的表达情况，改善细胞功能。因此为

VI

了探究MSCs能否恢复高糖环境下肾脏细胞的功能，选用来源广泛的

hUCMSCs及以人近曲小管上皮细胞（HumanKidney-2,HK2）作为体

外实验细胞系，用30mM的高糖培养基模拟DKD体内高糖环境，测

定HK2的变化，以此探讨hUCMSCs对HK2的作用。

目的：

本研究以hUCMSCs和HK2作为实验细胞系，探讨30mM高糖环境

对HK2的细胞活力及自噬影响，并建立hUCMSCs与HK2共培养体系，

探讨hUCMSCs对高糖环境中HK2细胞活力及自噬的影响。

方法：

将HK2细胞分为4组：低糖组（LG组5.5mM）、高糖组（HG

组30mM）、hUCMSCs共培养组和甘露醇组（5.5mM葡萄糖+24.5mM

CCK85.5mM10mM20mM

甘露醇），检测四种不同糖浓度培养基（、、、

30mM）培养HK2在24h、48h以及72h的细胞活力；WesternBlot

检测HK2自噬标志物（Beclin1及p62）的变化。RT-PCR检测自噬标

LC3Beclin1p62mRNA

志物（、及）的变化。

结果：

①CCK8结果显示：HG组（30mM）培养基中HK2的细胞活力

LG5.5mM24h48h72h(P0.05),hUCMSCs

较组（）在、及时显著降低与

共培养后HK2细胞活力较HG组升高，而甘露醇组HK2细胞活力未

受明显影响。②WesternBlot结果表明：HG组中HK2的自噬标志物

Beclin1p62