生物显微技术课件.pptxVIP

石蠟切片的製作;石蠟切片的過程;一、動物的處死;二、動物組織取材;三、固定;灌注式;3、固定液;醛類固定劑;非醛類固定劑;丙酮及醇類固定劑;混合固定劑;4%多聚甲醛磷酸緩衝液pH7.4

成分：4%多聚甲醛溶於1倍的磷酸緩衝液中，

1倍的磷酸緩衝液:PBSMV

NaCl140mM58.44

KCl2.7mM74.55

NaH2PO4?12H2O，10mM358.14

KH2PO41.8mM136.09

調pH至7.4。

;Bouin’s液;固定組織時應注意：

①應力求保持組織新鮮，勿使其乾燥，儘快固定處理。

②組織塊不易過大過厚，必須小於2cm×1.5cm×0.3cm，尤其是組織塊厚度必須控制在0.3cm以內。

③固定液必須有足夠的量，在體積上一般大於組織20倍以上，否則組織中心固定不良影響效果。

;固定時間的選擇;組織固定後的處理;四、脫水;

乙醇：最常用的脫水劑

一般組織：70%---80%----90%--100%---100%

特殊組織：30%--40--%--50%---60%---70%---80%---90%--100%---100%每步30分鐘左右。

要求：完全脫淨，保證脫水梯度和每一步脫水時間

不能過度脫水（使組織變脆）

不同組織脫水時間不同：

大的緻密的組織需要延長脫水時間

為加速各級酒精的穿透力，脫水可

在37℃溫箱中進行。

;五、透明或媒浸;六、包埋;石蠟包埋;;;七石蠟切片;;火棉膠切片法;;冰凍切片法;染色;;蘇木精(hematoxylin)、伊紅（eosin）染色法（ＨＥ染色）;Delafield蘇木精液;石蠟切片蘇木精染色步驟;;ＨＥ染色結果;;組織化學;定義;;組織化學的技術要求;組織化學的特點;研究內容;糖類顯示;;核酸顯示;分類;酶類的顯色方法;酶的組織化學反應;;鹼性磷酸酶鈣-鈷顯示法;鹼性磷酸酶作用液(pH9．3)

溶液1：2％甘油磷酸納

2％巴比妥納

2％硝酸鈣

2％硫酸鎂(或氯化鎂)

蒸餾水

溶液2：1％硝酸鈣。

溶液3：1％硝酸鑽。

溶液4：1％硫化銨(臨用時現配)

;方法;免疫組織化學;免疫組織化學ImmunocytochemistryICC;免疫組織化學;免疫細化學的基本理論;抗原抗體反應;;免疫組織化學特點;基本技術方法;免疫組織化學分類;免疫酶細胞化學;酶的種類;酶的要求;基本步驟;抗體製備;酶橋??;抗過氧化物酶法（PAP）;PAP法的評價;親和免疫細胞化學技術;親和免疫細胞化學技術特點;抗生物素—生物素免疫細胞化學染色法;抗生物素—生物素染色法;橋抗生物素—生物素技術（BridgedAvidin–Biotintechnique,簡稱BRAB技術）;;操作步驟;標記生物素—抗生物素技術（LabelledAvidin—Biotintechnique,LAB技術）;;;設計對照實驗;陽性對照;陰性對照;免疫細胞化學結果的判斷;免疫組化檢測action蛋白在大鼠卵巢組織中的表達。請選擇抗體組合，設計實驗。

人抗大鼠action（同種型IgG）

大鼠抗人action（同種型IgG）

兔抗大鼠action（同種型IgG）

生物素標記的兔抗人IgG

生物素標記的兔抗人IgM

生物素標記的人抗兔IgG

生物素標記的人抗兔IgM

鹼性磷酸酶標記的卵白素

鹼性磷酸酶標記山羊抗人IgG

辣根過氧化物酶標記山羊抗兔IgG

;原位雜交組織化學;核酸分子雜交技術;;定義：

特定標記的已知序列的核酸作為探針與細胞或組織切片中的核酸進行雜交並對標記的探針進行檢測的方法稱為原位雜交。

;;分類;原理;;優點;應用;;;原位雜交流程;;缺刻平移法標記DNA探針DNANicktranslation;DNARandomprimedlabeling;RNAprobelabeling

;原位雜交條件的選擇;增強組織的通透性和核酸探針的穿透性;雜交;Tm＝79．8一D十0.584×％GC十16×lg[Na＋]一F×(％formamine)一L

D：是用來校正各種不同類型雜交體熱穩定性的差別係數。DNA：DNA10

DNA：RNA5