人教C版高中生物选择性必修3第3章基因工程第2节第1课时筛选和获取目的基因与构建基因表达载体课件.pptVIP

视角应用视角1载体的组成元件和构建过程1.下面是利用基因工程技术培育转基因植物,进而生产可食用疫苗的部分过程示意图,其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性内切核酸酶。下列说法错误的是()A.图示过程是基因工程的核心步骤B.表达载体构建时需要用到限制酶SmaⅠC.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来D.除图示组成外,表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构B第3章第2节第1课时筛选和获取目的基因与构建基因表达载体学习目标1.运用系统思想解释基因工程的基本步骤和原理。2.基于细胞内DNA复制的原理,阐明PCR的原理,说出PCR所需的条件及其反应过程。3.结合模式图说出基因表达载体的组成,并理解构建目的。基础落实·必备知识全过关重难探究·能力素养全提升目录索引基础落实·必备知识全过关知识点一基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序主要需要四个步骤:的筛选与获取→的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。?目的基因基因表达载体知识点二目的基因的筛选与获取1.筛选合适的目的基因(1)目的基因:在基因工程的设计和操作中,用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。目的基因主要是指的基因。?(2)筛选方法:从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。(3)获取目的基因的方法有:①人工合成目的基因;②用特异性地快速扩增目的基因;③通过构建基因文库来获取目的基因。?编码蛋白质PCR2.利用PCR获取和扩增目的基因(1)PCR的目的:在体外对目的基因的核酸序列进行大量复制。(2)PCR原理:。?(3)PCR条件:一定的缓冲液、、分别与两条模板链结合的2种引物、4种脱氧核苷酸和酶。?分别与两条模板链结合,使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸DNA半保留复制DNA模板耐高温的DNA聚合(4)每次循环的过程:变性→复性→延伸。①变性:当温度超过90℃时,。打开DNA双链?②复性:冷却至℃左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。?③延伸:加热至72℃左右时,4种脱氧核苷酸在耐高温的的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。?双链DNA解聚为单链50DNA聚合酶(5)特点:上一轮循环的产物作为下一轮反应的,每一次循环后,目的基因的量可以,即成指数形式扩增(约为2n,n为扩增循环的次数)。?(6)鉴定:常用来鉴定PCR的产物。?模板增加一倍琼脂糖凝胶电泳知识点三基因表达载体的构建1.基因表达载体的构建目的使目的基因在受体细胞中,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够和。?2.基因表达载体的组成稳定存在表达发挥作用启动子上游RNA聚合酶转录终止子下游转录标记目的基因3.基因表达载体的构建过程(1)首先用一定的切割载体。?(2)然后用限制酶或能产生的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。?(3)再利用将目的基因片段拼接到载体的切口处。?限制酶同种相同末端DNA连接酶旁栏边角想一想1.[教材P77相关信息]为什么PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2+?2.[教材P77相关信息]引物的化学本质是什么?3.[教材P79旁栏思考]用PCR技术可以扩增mRNA吗?提示真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活。因此,PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2+。提示引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸。提示mRNA不可以直接扩增,需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。结论语句辨一辨(1)PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应。()(2)PCR扩增技术中,需用解旋酶使双链DNA解聚。()(3)PCR过程使用的DNA聚合酶的特点是耐高温。()(4)PCR技术中,DNA模板链上碱基G和C的比例越高,DNA变性解聚为单链的温度就越高。()(5)基因工程操作程序的核心步骤是目的基因的获取。()(6)基因表达载体含有启动子和终止密码子。()(7)标记基因不一定是抗生素抗性基因。()×√×√