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选修3;考纲内容;一、基因工程;常用类型; (3)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
①特点:具有一个至多个限制酶切割位点,供外源DNA
片段(基因)插入其中;携带外源DNA片段进入受体细胞后,在
细胞中进行自我复制,或整合到染色体DNA上,随染色体DNA
进行同步复制;有特殊的____________,供重组DNA的鉴定;3.基本步骤; b.前提条件:要有一段已知目的基因的________________,
以便根据这一序列合成引物。
c.条件:目的基因、__________、DNA聚合酶和4种脱氧; e.结果:每一次循环后,目的基因的量可以____________,
即成指数形式扩增(约为2n,n为扩增循环的次数)。
③人工合成法:如果基因比较小,核苷酸序列又已知,可;(3)将目的基因导入受体细胞
①导入植物细胞:采用________________、基因枪法、花;技术名称;二、蛋白质工程;3.进展;三、生物技术的安全性和伦理问题;2.生物技术的伦理问题; 3.禁止生物武器
(1)生物武器的种类:致病菌、病毒、生化毒剂及经基因重
组的致病菌等。
(2)生物武器的散布方式:直接或通过食物、生活必需品等;[判断正误]
1.切割质粒的限制性核酸内切酶均能特异性地识别6个核;考点一;(4)作用结果——黏性末端和平末端。;(5)作用实质:使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键; c.为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使
用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择用PstⅠ
和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。;2.DNA连接酶;条件;4.基因工程的基本原理和理论基础概括(如下图); 基因工程操作基本工具的几个易错点
(1)限制酶是一类酶,而不是一种酶。; (5)不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都
相同,同一个DNA分子用不同的限制酶切割,产生的黏性末
端一般不相同。;限制酶;图1; (1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用________
_____两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过
__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒,需将
其转入处于________态的大肠杆菌。; [解析](1)选择的限制酶应在目的基因两端??在识别位点,
但BamHⅠ会破坏质粒中的抗性基因,因此选BclⅠ和HindⅢ。
酶切后的载体和目的基因片段,通过DNA连接酶作用后获得
重组质粒。为了扩增重组质粒,需将其转入处于感受态的大肠
杆菌中。(2)为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌,根据质粒上
的抗性基因,应在筛选平板培养基中添加四环素。PCR技术要
求两种引物分别和目的基因的两条单链结合,沿相反的方向合
成子链。(3)根据BamHⅠ和BclⅠ的酶切位点,BamHⅠ酶切
的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接,连接部位的6个;不同。(4)根据BamHⅠ、BclⅠ和Sau3AⅠ的酶切位点可知,
Sau3AⅠ在质粒上有三个酶切位点,完全酶切可得到3种片段
分别记为A、B、C,若部分位点被切开,可得到AB、AC、BC、
ABC4种片段,所以用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得7种
大小不同的DNA片段。;种类;种类;考向2;二是根据目标蛋白质的________序列,推测出相应的mRNA序
列,然后按照碱基互补配对原则,推测其DNA的__________
序列,再通过化学方法合成所需基因。; [解析](1)利用逆转录法合成目的基因是以mRNA为模板,
在逆转录酶的催化作用下合成单链DNA,然后在DNA聚合酶
作用下,合成双链DNA分子;蛋白质工程合成目的基因的过
程是:根据目标蛋白质的氨基酸序列,推测相应的mRNA序列,
然后按照碱基互补配对原则,推测DNA中脱氧核苷酸的排列
顺序,再通过化学方法合成。(2)PCR过程中需要酶、底物、模
板、引物和能量等条件。(3)目的基因和运载体结合,形成重组
DNA(基因表达载体)。(4)在利用大肠杆菌作受体细胞时,需要
先用Ca2+处理,使之成为感受态细胞,有利于其吸收重组DNA;[答案](1)逆转录; [考向预测]
1.以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段,分析回答问
题:; 解析:(1)根据题意和图示分析可知:①和③是由一种限制
酶切割形成的平末端.两者要重组成一个DNA分子,所用DNA
连接酶通常是T4DNA连接酶,形成磷酸二酯键。(2)②和④是
由另一种限制酶切割形成的黏性末端,两者要形成重组DNA
片段,所用DNA连接酶
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