SN 1396-2004弓形虫病间接血凝试验.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1396—2004

弓形虫病间接血凝试验

Indirecthemagglutinationtestfortoxoplasmosis

2004-06-01发布

2004-12-01实施

教

教码

9.

中华人民共和国

国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T1396—2004

前言

本标准的附录A为规范性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准由中华人民共和国湖北出入境检验检疫局负责起草。

本标准主要起草人：陈建军、郭明星、付文鹏、赵晖等。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

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SN/T1396—2004

弓形虫病间接血凝试验

1范围

本标准规定了弓形虫病的间接血凝(IHA)试验操作方法。

本标准适用于动物弓形虫病的检疫、诊断及抗体水平的检测。

2材料和试剂

2.196(12×8)孔110°V型血凝板及玻璃盖板。

2.2可调式微量移液器及吸头。

2.3平板振荡器。

2.4弓形虫1HA诊断液(抗原效价≥1:1024),标准阴性对照血清(效价≤1:4),标准阳性对照血清(效价≥1:1024)。

2.5稀释液按附录A所示要求配制，所用试剂均为分析纯。

3采样

无菌采动物静脉血液约1mL～2mL,静置自然析出血清或待血液凝固后以600g离心分离血清，56℃水浴灭活30min,预冷，用健康公绵羊红细胞(按血清/红细胞体积比约1:1混匀)室温吸附2h

(或4℃冰箱过夜),600g离心10min,取上清(要求无血球、无溶血、无杂菌污染),置4℃冰箱备检。

4操作步骤

4.1取洁净的血凝板，于各孔中加入75μL稀释液。

4.2取受检血清25μL加入第一列孔中，用移液器反复吹吸混匀，取25μL加入第二列孔，混匀后取25μL加入第三列孔中，如此4倍稀释至第6孔，混匀即1:4096弃去25μL(对于大量样品可只稀释至1:64见表1)。

表1弓形虫病间接血凝试验操作术式

孔号

2

3

4

5

6

7

血清稀释度(1:)

4

16

64

256

1024

4096

稀释液空

白对照

稀释液/μL

75|

25)

75|

25|

75|

25/

751

25)

75

25

75

弃25

受检血清/μL

诊断液/μL

25

25

25

25

25

25

25

感作

22℃~37℃静置2h～3h

结果举例(样)

十十十十

十十十十

++

—

4.3每次试验须同时作标准阴、阳性血清及稀释液空白对照，标准阳性血清对照应稀释至1:4096,标准阴性血清对照应稀释至1:64,标准阴、阳性血清稀释方法同受检血清。

4.4取弓形虫IHA诊断液(如为冻干制品需按使用说明洗涤稀释后使用),于各检验孔中加入25μL,置振荡器上振荡约1min(或手持血凝板绕圈轻摇至各孔中血球分布均匀),盖上玻璃盖板，22℃~37℃

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静置约2h～3h(当稀释液空白对照呈现“一”时)观察判定结果。

5结果判定

5.1判定方法

a)100%的红细胞在孔底四周呈均匀、致密的膜样凝集，孔底中央无红细胞沉积，记“十十十+”。b)75%的红细胞在孔底四周呈膜样凝集，有少量未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈很小的圆

点，记“+++”。

c)50%的红细胞松散的凝集在孔底四周，其余50%未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈较大的圆

点，记“十4”。

d)25%的红细胞凝集在孔底四周，其余大部分未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈很大的圆点，

记“十”。

e)所有红细胞均不凝集，全部沉积在孔底中央呈规则的最大的圆点，记“—”。

5.2判定标准

a)以呈现“十+”的血清最大稀释度为该血清的抗体滴度。

b)当阳性对照血清抗体滴度不低于1:1024,阴性对照血清各孔均为“一”(第一孔允许存在前

滞现象“+”),稀释液空白对照为“一”时，对受检血清抗体滴度进行判定，否则试验不成立。

c)受检血清抗体滴度≥1:64时判为阳性(如表1所示血清抗体滴度为1:64,判为阳性),

≤1:16判为阴性。

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附录A

(规范性附录)

稀释液的配制

A.1pH7.2,0.15mol/L磷酸盐缓冲液(PBS):

磷酸氢二钠(Na?HPO.·12H?O)19.34g

磷酸二氢钾(KH?PO?)