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胡椒碱抑制脂多糖活化的结肠腺癌细胞炎症因子IL-8的表达

刘冲;赵家敏;杨龙君;张力

【摘要】目的探讨胡椒碱抑制脂多糖(LPS)活化的结肠腺癌细胞炎症因子IL-8的表达及作用机制.方法胡椒碱对结肠腺癌细胞增殖作用的检测方法为WST-1法采用流式微球捕获蛋白定量技术检测炎症因子(IL-8、IL-1B、IL-6、IL-10、TNF-a和IL-12p70)蛋白水平的表达，采用实时定量PCR法检测IL-8mRNA的表达，采用Westernblot法检测JNK和p38MAPK信号通路的活化水平结果胡椒碱处理可剂量依赖性地抑制结肠腺癌细胞的增殖，且胡椒碱对结肠腺癌细胞的毒性相对较小；胡椒碱干预能够有效地抑制LPS活化的结肠腺癌细胞IL-8的分泌，且具有剂量依赖性；单纯胡椒碱处理后IL-8mRNA表达水平非常低，而经过LPS处理后,化-8mRNA的表达水平显著提高,LPS干预后再经过胡椒碱处理结肠腺癌细胞IL-8mRNA的表达水平又降低，表明胡椒碱对LPS活化的结肠腺癌细胞IL-8蛋白的表达是在转录水平控制的；LPS干预结肠腺癌细胞能有效地激活p38和JNK信号通路，且随着时间的延长,p-p38及p-JNK逐渐增高，具有时间依赖性，而LPS干预后经过胡椒碱处理,15min后p38及JNK的磷酸化水平明显受到抑制,与单纯LPS干预组相比差异有统计学意义(P0.05),随着时间的推移,30min时p38和JNK的磷酸化抑制作用仍较显著(均P0.05),而到60min时p38和JNK的磷酸化抑制作用已经明显减弱(均P0.05),说明胡椒碱对p38和JNK的磷酸化具有明显的抑制作用结论胡椒碱可能从转录水平上抑制LPS诱导的结肠腺癌细胞分泌促炎因子IL-8,即通过下调p38MAPK和JNK信号通路上p38和JNK的磷酸化进一步降低IL-8的分泌，具体机制还有待于进一步阐明.

【期刊名称】《华中科技大学学报(医学版)》

【年(卷)，期】2016(045)001【总页数】5页(P65-69)【关键词】胡椒碱;结肠腺癌细胞;脂多糖；IL-8【作者】刘冲;赵家敏;杨龙君涨力

【作者单位】山东省潍坊医学院附属医院胃肠外科，潍坊261031;中国人民解放军第八十九医院泌尿外科，潍坊261021;山东省潍坊医学院附属医院胃肠夕卜科，潍坊261031;山东省潍坊医学院附属医院胃肠夕卜科，潍坊261031

【正文语种】中文

【中图分类】R573胡椒碱是一种广泛存在于自然界中的桂皮酞胺类生物碱，对胃肠疾病有较好的抗炎作用［1］。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是细菌内毒素的主要成分，可以诱导炎症因子(IL-8)等的分泌，造成组织严重损伤［2-3］。LPS刺激人结肠腺癌细胞，是常用的人体肠炎体外细胞模型，能刺激信号传导，本研究探讨胡椒碱对LPS刺激的SW480细胞炎症因子的表达和MAPK信号通路的影响，初步探讨胡椒碱发挥抗炎作用的机制。

1.1材料

人结肠腺癌细胞株SW480从中科院北京细胞库购买；胡椒碱(含量＞99%，熔点75.5~77.5°C)购自宁夏制药厂；LPS、L15培养液、p38、p-p38(磷酸化的p38)、c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminalkinase,JNK)、磷酸化的JNK(p-JNK)和B微管蛋白(B-tubulin)抗体购自Sigma公司；WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒购自Gibco公司；微量样本多指标流式蛋白定量(CytometricBeadsArray,

CBA）试剂盒、人类细胞活素炎症试剂盒（Humaninflammationcytokineskit）购自美国BD公司；全蛋白提取试剂盒购自上海碧云天公司；超敏ECL化学发光试剂盒（BeyoECLPlus）购自上海碧云天公司。

SW480细胞培养

将SW480结肠腺癌细胞置于含有10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100Mg/mL链霉素的L15培养液中，在37°C、无CO2培养箱中培养48h后，取对数生长期细胞进行实验。

WST-1法检测细胞增殖

取对数生长期的细胞接种于96孔板内，每孔接种浓度为每孔100mL（1x104个细胞），在37C,不含有CO2的培养箱中培养1d后将培养液换成含有胡椒碱的培养液，在培养2d后，加入WST-110mL继续培养，在波长450nm下测定吸光度值心）。空白对照组细胞培养只含有培养液。增殖率=（实验组A450nm-空白组A450nm）/（对照组A450nm-空白组A450nm）x100%，并绘制细胞增殖曲线，计算半数抑制浓度（halfmaxim