《临床输血检验技术》课件——血小板血型检测技术.pptxVIP

临床输血检验技术血小板血型检测技术学习要求简易致敏红细胞血小板血清学试验原理指示红细胞（IgG抗RealhD致敏红细胞）患者血小板PBS患者血清/血浆50μl/孔各25μl/孔甲醛固定20分钟阳性25μl/孔洗涤5次血小板单层阳性反应反应板（固相化血小板）阴性阴性反应简易致敏红细胞血小板血清学试验制备固相化血小板生理盐水洗涤5次血液7mlACD-A液1ml富血小板血浆100g*10minACD-A液调整血小板浓度101g*15min患者血小板50μl/孔甲醛固定20分钟洗涤5次反应板（固相化血小板）简易致敏红细胞血小板血清学试验间接试验（检查患者血清中的抗血小板抗体）指示红细胞（IgG抗D抗体致敏红细胞）患者血清25μl/孔PBSPBS25ul阳性各25μl/孔静置4小时室温湿盒静置1小时洗涤2次阳性反应静置4小进血小板单层阴性阴性反应简易致敏红细胞血小板血清学试验直接试验（检查血小板表面结合的抗血小板抗体）指示红细胞（IgG抗D抗体致敏红细胞）PBS各25μl/孔静置4小时阳性反应静置4小进阴性反应简易致敏红细胞血小板血清学试验质量控制1．待检的血清或血浆标本检测前应充分离心以去除颗粒及聚焦物，否则会出现假阳性结果；标本脂类含量高或微生物污染也会导致假阳性结果。纤维蛋白原未充分析出的血清标本也会导致错误结果。2．血小板悬液的浓度要符合要求，血小板数量太少、浓度过低将会影响试验结果；特别注意不能将血小板置于4℃冰箱储存。3．待检测的标本只能用血清或血小板，检查前需2800×g离心10分钟以上以去除沉淀，以免颗粒及微聚物造成假阳性；高脂血或微生物污染也会造成假阳性结果。4．指示红细胞使用前未充分混匀或试验中微孔板离心不充分，可导致假阳性结果；过度离心会导致假阴性结果。5．为防止静电干扰，操作过程需在室温湿盒中水湿润状态下进行。简易致敏红细胞血小板血清学试验方法学评价方法评价简易致敏红细胞血小板血清学试验简便快速，可用于血小板抗体（HLA，HPA）检测和交叉配血试验，也可用于血小板抗原的鉴定以及血小板自身和药物依赖性抗体检测。微柱凝胶血小板相容性试验操作简便、快速、敏感性强，结果易于观察，属于微柱凝胶间接血凝试验。可用于血小板交叉配血试验、血小板抗体筛检和致敏血小板检测等。单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验敏感性强，可以检测出血小板膜上微量表达的HPA-5抗原。可用于鉴定血小板抗原和血小板同种特异性HPA抗体，以及血小板交叉配血试验。但由于HPA定型血清来源困难，本方法主要用于对部分HPA基因定型结果的验证。改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验特异性较高，血小板无需氯喹或酸预处理就能区分血清中的HLA和HPA抗体。主要用于血小板抗体特异性鉴定试验，以便血小板抗体阳性患者输注对应抗原表达阴性的供血者血小板。流式细胞术可用于鉴定血小板抗原，也可用于检测血小板抗体和交叉配合试验，虽然敏感性很高，但需要特殊仪器和专业操作人员，成本较高。分子生物学检测PCR-SSP是最简单常用的测定血小板HPA基因型的方法。PCR-RELP法比较简单，DNA纯度要求不高，实验重复性好，适合大批量检测。PCR-ASO特异性强，但杂交过程费时、繁琐，杂交背景较强或杂交信号较弱时，结果难以判断。??想一想简易致敏红细胞血小板血清学试验直接试验和间接试验分别检查什么？