3.2 基因工程的基本操作程序-高二下学期生物人教版选择性必修三.pptx

1基因工程的基本操作程序

目录contents基因工程概述目的基因获取与鉴定载体选择与构建宿主细胞选择与转化工程菌构建与筛选目的基因表达与检测基因工程安全性考虑

301基因工程概述

基因工程是通过人工手段，在实验室里对生物的遗传基因进行改造和重新组合的技术。定义基因工程的主要目的是获取人们需要的生物类型或生物产品，实现基因在不同生物之间的转移，定向地改造生物的遗传性状。目的基因工程定义与目的

基因工程技术发展历程初期阶段20世纪70年代初，基因工程技术初步建立，实现了DNA的切割和连接。蓬勃发展阶段20世纪70年代末至80年代，基因工程技术得到迅速发展，出现了大量基因工程药物和疫苗。成熟应用阶段20世纪90年代至今，基因工程技术已广泛应用于农业、医药、环保等领域，取得了显著的社会和经济效益。

医药领域基因工程技术在医药领域的应用主要包括生产基因工程药物、基因诊断和基因治疗等。例如，利用基因工程技术生产胰岛素、干扰素等生物药物，为疾病治疗提供了新的手段。农业领域在农业领域，基因工程技术主要用于培育高产、优质、抗逆的农作物新品种，以及提高畜禽的生产性能等。例如，通过基因工程改造的转基因作物，具有抗虫、抗病、抗除草剂等优良性状。环保领域基因工程技术在环保领域的应用主要包括污染治理和生物修复等。例如，利用基因工程技术培育出能够降解有毒有害物质的微生物，为环境治理提供了新的途径。工业领域在工业领域，基因工程技术可用于生产高附加值的生物制品，如酶制剂、食品添加剂等。此外，基因工程技术还可用于改进传统发酵工业，提高产品产量和质量因工程应用领域

302目的基因获取与鉴定

0102目的基因来源及选择依据选择依据包括基因的功能、表达模式、稳定性以及与宿主细胞的兼容性等。目的基因主要来源于基因组文库或cDNA文库。

克隆策略包括基因的全长克隆、部分克隆以及定点突变等。方法上常采用PCR技术、基因合成、基因文库筛选以及基因编辑技术等。目的基因克隆策略与方法

目的基因鉴定技术及应用鉴定技术包括DNA测序、限制性酶切分析、Southern杂交以及基因表达分析等。应用方面，目的基因鉴定在基因治疗、基因疫苗、转基因作物以及生物制药等领域具有广泛前景。

303载体选择与构建

自主复制、结构稳定、容量适中，常用于原核生物基因克隆和表达。细菌质粒高感染效率、整合入宿主基因组，适用于构建基因组文库和基因敲除。噬菌体高转染效率、宿主范围广，常用于真核生物基因表达和疫苗制备。动植物病毒载体类型及特点比较

03采用定点突变技术对载体进行改造，以满足特定实验需求。01选择合适的复制子和选择标记确保载体在宿主细胞中的自主复制和筛选。02插入多克隆位点便于外源基因的插入和表达。载体构建策略与方法

载体稳定性评估及改进通过连续传代培养，检测载体遗传信息的保持情况。采用限制性内切酶酶切和PCR扩增等方法，检测载体结构的完整性。比较不同载体在相同条件下的转化效率，以评估载体的适用性。对载体进行生物安全评估，确保其在基因治疗和疫苗制备等领域的安全性。遗传稳定性结构稳定性转化效率安全性评估

304宿主细胞选择与转化

如大肠杆菌，繁殖迅速、操作简单、成本低廉，但缺乏真核细胞的蛋白质修饰系统。原核细胞如酵母、哺乳动物细胞等，具有蛋白质修饰系统，能表达更接近天然状态的蛋白质，但操作复杂、成本较高。真核细胞可用于表达植物来源的基因或生产植物次生代谢产物，具有生物安全性好、生产成本低等优点。植物细胞如昆虫细胞等，可用于表达某些特定功能的蛋白质，如毒素、酶等。动物细胞宿主细胞类型及特点比较

根据目标蛋白质的特性选择合适的宿主细胞株，以提高表达效率和产量。选择合适的宿主细胞株调整培养基中的碳源、氮源、无机盐等成分，以满足宿主细胞生长和代谢的需求。优化培养基成分如温度、pH值、溶氧量等，以维持宿主细胞的正常生长和代谢活动。控制培养条件对于某些需要诱导表达的基因工程产品，可通过添加诱导剂来提高表达水平。添加诱导剂宿主细胞转化条件优化

转化效率评估指标包括转化子数、转化频率、表达水平等，用于衡量转化过程的效率和效果。提高转化效率的方法采用高效的转化方法，如电穿孔法、显微注射法等；优化转化条件，如调整DNA浓度、改进感受态细胞制备方法等；选择合适的筛选标记和抗性基因，以提高筛选效率和准确性。转化效率评估及提高方法

305工程菌构建与筛选

选择合适的目的基因选择适当的载体重组DNA技术转化或转导技术工程菌构建策略及方法根据工程菌所需表达的蛋白质或产物特性，选择合适的目的基因进行克隆。利用限制性内切酶、DNA连接酶等工具酶，将目的基因与载体进行体外重组。根据需要选择合适的质粒、噬菌体或病毒载体，将目的基因插入其中。将重组DNA分子导入宿主细胞，构建成工程菌。

抗生素抗性筛选分子杂交筛选