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荧光素标记抗体及其制备1.荧光素是一种染料,在紫外光、蓝紫光等短波光照射下被激发释放出波长较长的可见光,称为荧光。2.常用的荧光素异硫氰酸荧光素(FITC)、四乙基罗丹明(RB200)。荧光素标记抗体及其制备3.作用荧光抗体与相应抗原结合后,在紫外光或蓝紫光等照射下,标记抗体上的荧光素发出荧光,通过荧光显微镜检测荧光强度和荧光现象，可知抗原的存在及部位，依荧光强弱也可测知抗原量的差异。荧光素标记抗体及其制备例：直接法：将待测标本固定于玻片表面，滴加已知荧光抗体后再以缓冲液冲洗，干燥后于荧光显微镜下观察。(1)过程：+待测抗原荧光素+抗体荧光抗体(一段时间后冲洗)荧光镜检测结果(2)结果：阳性—可见带荧光的抗原抗体复合物阴性—无荧光(3)用途：用以检测病毒感染细胞、细菌和沉积于组织中的免疫复合物等。(4)特点：简单、特异性高；敏感性低、每检一种抗原就需要制备一种荧光抗体。荧光素标记抗体及其制备荧光素标记抗体及其制备荧光素标记抗体及其制备免疫荧光荧光素标记抗体及其制备4.荧光素标记抗体制备（1）将提纯抗体用冷pH7.2PBS稀释成10-20mg/ml的浓度。（2）按蛋白量的1/80-1/100加入FITC,先用pH9.50.5M碳酸盐缓冲液溶解FITC,于5min内滴加到抗体球蛋白溶液中。（3）最后补加碳酸盐缓冲液,使其总量为抗体球蛋白溶液量的1/10。荧光素标记抗体及其制备（4）4℃搅拌标记12-15h(20-25℃、1-2h)。（5）用大量的pH7.2PBS透析4h,用葡萄糖凝胶滤除标记抗体中游离荧光素,通过DEAE纤维素层析除去过高标记和未标记的蛋白分子。（6）测定效价和特异性，分装保存。