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读懂一张图，让你培养出完美的“肿瘤类器官”

近期，一张图吸引了翘仔的目光，简明扼要的总结了不同肿瘤类器官培养方法的

关键。

图片源自参考文献：doi:10.3389/fcell.2023.1232528

本文将详细描述图中类器官培养相关知识：

胃癌类器官培养简要步骤

结直肠癌类器官培养体系

肝癌类器官培养体系

乳腺癌类器官培养基组分(HansClevers等)

肺癌类器官培养基组分及配制指南

卵巢癌类器官培养基组分优化方案

类器官的起源可追溯到1907年，但是经历了一个漫长的停滞期，直到近十年才

得到快速发展，其中细胞因子的作用功不可没。2002年Michalopoulos等人发

现在添加HGF和EGF的条件下，肝细胞可自发转化为胆道上皮细胞，解开了类器

官发育的关键。2011年Spence等人在体外利用人多能干细胞成功培养出肠类器

官，并发现Wnt3A和FGF4是肠类器官培养的必要因子，研究结果扩大了类器官

的细胞来源并加速了类器官的发展。

自肠类器官培养成功以来，类器官技术在生物医学领域得到广泛发展，其巨大的

优势受到肿瘤研究者的青睐。肿瘤类器官可通过诱导多能干细胞分化产生，也可

直接从肿瘤组织中获得。非肿瘤类器官可在基因编辑后突变为肿瘤类器官，肿瘤

组织多来自患者手术切除标本或穿刺活检组织。

肿瘤类器官培养主要步骤

图片源自参考文献：doi:10.1016/j.gendis.2023.02.052

接下来，我们将重点介绍几种重要的肿瘤类器官培养基组分及方案：

01胃癌类器官培养

通过构建源自胃癌患者的类器官（PDO），能够直接对临床样本进行研究。

Vlachogiannis等人为了成功培养胃癌类器官，除了使用ADMEM/F12培养基和基

底膜基质外，还添加了EGF、Noggin、R-Spondin1、FGF-10等细胞因子。

胃癌类器官培养简要步骤

如下实验流程和数据均引用Vlachogiannis等人发表的文章（doi:

10.1126/science.aao2774），供参考。

1.配置类器官培养基：改良的DMEM/F12基础培养基，添加1xB27additive、

1xN2additive、0.01%BSA、2mML-Glutamine、100units/ml青霉素-链霉

素，以及如下表的细胞因子或其它添加物：

因子浓度因子浓度

EGF50ng/mlWnt-3A100ng/ml

Noggin100ng/mlSB2021905μM

R-Spondin1500ng/mlGastrin10nM

FGF-1010ng/mlProstaglandinE21μM

FGF-b10ng/mlA83-010.5μM

HGF*20ng/mlY-2763210μM

*HGF仅用于胆管癌类器官。

2.样本收集：通过图像引导或内窥镜手术收集活检样品。收获后，样本置于冷

PBS中，并在冰上运输到实验室，20分钟-2小时内将组织切片切碎。

3.样本处理：组织切碎后，加入5ml5mM的PBS/EDTA，室温静置15分钟。用

含有2xTrypLe的1mMPBS/EDTA5ml在37℃消化1小时。施加机械力（如吹液）

以促进消化。

4.接种细胞：用改良的DMEM/F12培养基收集分离的细胞，并在4℃，1200转/

分离心5分钟，使细胞成球状，用120µlGFR基质胶重悬，接种到24孔或48

孔的平底细胞培养板中。

5.将基质在37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养20分钟，进行固化。然后添加

500µl配置好的PDO培养基，要完全覆盖培养孔。

6.每两天换一次培养基。

02结直肠癌类器官培养

患者来源的肿瘤类器官已成为结直肠癌临床前研究的一种出色的模型，原代上皮

细胞可在特定生长因子的控