发酵过程优化原理与实践第6章.docVIP

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第六章透明质酸发酵过程优化

第一节透明质酸发酵概述

一、透明质酸的分布、结构、性质与应用

透明质酸(Hyaluronicacid，简称透明质酸)，又名玻璃酸，是Meyer和Palmer于1934年首先从牛眼玻璃体中分离出的一种高粘性物质。Balazs于1960年将透明质酸用于复杂的视网膜脱离手术取得理想疗效后，透明质酸开始作为生化药物得到应用。透明质酸在日化工业(特别是化妆品工业)中也有广阔的应用前景。据报道，透明质酸在国际市场上的价格为2,000~100,000美元/kg。1985年透明质酸在国际市场上的总销售额为1亿美元，到1990年已达2亿多美元。国外已有多家公司生产透明质酸药品，如美国的Hyvisc，前苏联的Luronitel，澳大利亚的Etamucin及瑞士的Healon等。

(一)透明质酸的分布、结构和性质

透明质酸为白色、无定形固体，是由葡萄糖醛酸(GlcA)和N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)以?-1,3和?-1,4糖苷键连接成的二糖单元重复构建而成的丝状高分子聚合物，其结构如图6-1-1所示。透明质酸具有许多天然粘多糖共同的物理性质，无嗅无味，溶于水，不溶于有机溶剂，水溶液的比旋光度为-70~-80?。

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图6-1-1透明质酸结构示意图

自然界中，透明质酸广泛地存在于动物的各种组织内，如结缔组织、脐带、皮肤、人血清、鸡冠、关节滑液、脑、软骨、眼玻璃体、人尿、鸡胚、兔卵细胞、动脉和静脉壁。其中以哺乳动物的玻璃体、脐带和关节滑液中透明质酸产量最高。在这些组织中，透明质酸常与蛋白质结合，并与其它粘多糖共存，以溶解的形式存在于玻璃体和滑液中，而以凝胶形式存在于鸡冠和脐带中。

透明质酸的分子量在数十万到数百万之间。分子量为4?106Da的分子，链长约为10?m。由于直链链轴上单糖之间氢键的作用，透明质酸分子在空间上呈刚性的螺旋柱型，半径为200nm，柱内侧因有大量羟基而产生强亲水性∶透明质酸在溶液中可亲和约为其自身重量1000倍的水分。这些水在螺旋柱内固定不动，不易流失。

透明质酸除具有强烈的亲水性外，其溶液还有着独特的流变学特性。透明质酸水溶液是一种非牛顿流体，有着良好的粘弹性和应变性。这些性质主要取决于其分子量的大小和溶液浓度与酸度的高低。一般来说，浓度高、分子量大，则溶液粘度也高。Gibbs发现低浓度的透明质酸溶液主要表现为粘性，而高浓度溶液则主要显示出弹性。在粘性与弹性之间有一个明确的临界浓度转变点，这个点与溶液的pH值有着很大的关系。

(二)透明质酸的主要用途

透明质酸在有机体内具有多种重要的生理功能，如润滑关节，调节蛋白质、水、电解质的扩散和运转，促进创伤愈合等，因此其在临床医学上有着巨大用途，例如∶透明质酸已成为现代眼科“粘性手术”的必备药物；利用透明质酸独特的流体力学特性可治疗骨关节疾病；促进伤口的愈合；作为易于检测的观察指标辅助诊断某些疾病等。透明质酸目前及潜在的医学医药应用见表6-1-1。

表6-1-1透明质酸在医学医药上的应用

应用领域

主要功能和作用

眼科

玻璃体的替代品，舒适的滴眼药，眼科手术中的优良粘合剂。

矫型外科

增强骨骼关节间的滑动，用于矫型手术。

外科手术

用于耳鼻喉科手术，用作腹部、手部的抗粘连接剂。

骨关节术

有希望将动物关节术中的成功经验用于人类。

伤口愈合

促进组织再生、重塑和愈合，其银盐可缓慢向伤口释放银离子而促进伤口愈合。

临床诊断

用作肝、肿瘤的诊断指标。

此外，透明质酸具有特殊的保水作用。高分子量的透明质酸最多可以持水6L/g，因而是一种理想的天然保湿因子(NaturalMoisturingFactor，简称NMF)。它可以改善皮肤的营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老。含有透明质酸的化妆品目前被国际上公认为“仿生化妆品”、“第四代化妆品”，许多国家在竞相研究开发。表6-1-2列出透明质酸结构、性能对皮肤的影响。

表6-1-2透明质酸结构、性能对皮肤的影响

二、透明质酸的生物合成

(一)透明质酸的生物合成途径

1937年，Kendall等发现溶血性链球菌Streptococcushaemolyticus可以合成透明质酸后，陆续报道了许多可产生透明质酸的微生物菌株。虽然到目前为止生物合成透明质酸的详细机制还不是很清楚，但根据现有的工作以及关于透明质酸两种UDP前体的研究，可以确定透明质酸的合成途径如图6-1-2所示。透明质酸是UDP-葡萄糖醛酸(UDP-GlcA)和UDP-N-乙酰葡萄糖胺(UDP-GlcNAc)在透明质酸合成酶作用下合成的。UDP-GlcA是糖醛酸途径的中间产物，与UDP-GlcNAc一样，它们的