基因工程步骤.pptx

基因工程步骤;基因操作基础步骤;基

因

工

程

基

本

过

程;;当前被较广泛提取使用目标基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。;;1）鸟枪法：;用DNA重组技术将某种生物总DNA用特定限制性内切酶切割成一个个片段，然后将这些片段随机地连接在一些质粒或其它载体上，再将它们转移到适当宿主细胞中，经过细胞增殖而组成各个片段无性繁殖系（克隆），当这些克隆多到能够包含某种生物全部基因时，这一批克隆总体就称为该种生物基因文库。;基因工程步骤;基因组DNA文库;

以目标基因转录成信使RNA为模板，反转录成互补单链DNA，然后在酶作用下合成双链DNA，从而取得所需基因。;;上述三种目标基因提取方法有何优缺点？;哪些新技术能大大简化基因工程操作技术？;PCR能够把指定基因片段数量放大;2）聚合酶链式反应即PCR技术;（二）基因表示载体构建;基因表示载体组成：;开启子：位于基因首端一段特殊DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终取得蛋白质;终止子：位于基因尾端一段特殊

DNA片断，能终止mRNA

转录;;（三）目标基因导入受体细胞;方法;1、将目标基因导入植物细胞方法：农杆菌转化法

（1）农杆菌介绍

（2）原理及适用范围;2、将目标基因导入动物细胞

（1）方法：显微注射法

（2）程序：

;2.微生物作受体细胞原因：;（四）目标基因检测和表示;再次检测;基因工程步骤;不能，受体细胞必须表现出特定性状，才能说明目标基因完成了表示。;多细胞生物检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目标基因，摄入基因是否表示（是否表现出对应性状）。淘汰无改变个体，保留有对应改变个体深入培养、研究。;从苏云金芽苞杆菌中提取抗虫基因;重组DNA技术操作主要步骤;;;;;