PCR质量控制(共64张课件).pptxVIP

临床基因扩增检验质量要求

;制定依据;临床基因扩增检验质量控制;标本;标本采集时间;标本采集量;如果检测结果至少1次为Ct40判断为阳性，否则判为阴性。

质控品检测结果在允许范围内

12S一个质控测定值超出±2s控制限。

标本的类型和采集量应根据所测病原体而定。

内部校准的辅助设备，实验室应根据国家计量部门或生产厂商的规定制定内部校准操作规程和要求，并有内部校准的详细记录

5ml灭菌离心管，离心，去上清，留沉淀用于核酸提取。

3）结果高于检测上限，则报告“高于检测上限”，如果需要精确定量结果，则应用阴性血清（浆）将样本进行100-1000倍稀释后再重新进行检测，结果乘上稀释倍数；

2)修复的设备必须经校准、检定（验证）或检测满足要求后方

根据常规条件下的变异（RCV）计算中的平均值和SD确定质控线，一般以X±2S为告警限，X±3S为失控限，将所得质控结果标在一张质控图上，简单明了。

定性检测定性检测的结果报“阴性”或“阳性”。

定性检测定性检测的结果报“阴性”或“阳性”。

已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，监测核酸提取和扩增检测的有效性

41S四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。

维护保养：75%乙醇擦拭

校准周期：参照国家计量部门或生产厂商的要求进行，厂家没有规定的则每年至少进行一次

室内质控品在扩增仪中的排列顺序：不宜固定位置,尽可能监测每一个孔扩增有效性

更换试剂批号：试剂批间差，应评价核酸提取效率和扩增效率

能再次投入使用

如果低于检测下限，但又有扩增曲线，则应重新检测，仍低于检测下限，则报告为“低于检测下限”。

室内质控品在扩增仪中的排列顺序：不宜固定位置,尽可能监测每一个孔扩增有效性;标本验收、拒收;标本运送;标本保存;标本接收;标本处理;实验室仪器设备;检测、验证方法（适用于定量项目）;仪器校准;扩增仪;恒温金属浴;移液器;生物安全柜;高速冷冻离心机;耗材、试剂要求;更换试剂批号质检;室内质量控制;质控品来源及使用;质控品设置、数量;质控品位置;质控品均值建立;常用质控规则的符号及定义;统计质控方法;Levey-Jennings质控图方法;由12S，13S，22S，R4S，41S，10X等规则组成，其中既有对随机误差检出敏感的，也有对系统误差敏感的。结合在一起，假失控和假告警概率低，误差检出能力增强，大大提高了失控的检出率。

在实践中13s、R4s规则常检出随机误差，而22s、41s和10x质控规则检出系统误差。;1)12S为警告规则，不是失控规则。

若本批检验没有出现控制结果超出控制线，表示本批结果没有问题，在控，可以发出报告。

若本批检验有1个控制结果超出（不包括正好在限值线上的结果）2S控制线，表示本批结果可能有问题，符合12S规则。是一个警告，但不是失控。;; 失控的表现如下：

2）13S即这个控制值不仅超出2S控制线（符合12S规则），而且还超出了3S限值（符合13S规则）。这是在检验中很少发生的（概率约为0.3%），是一个检出随机误差的失控规则。;;3）22S有两种表现：

l同批两个控制品结果同方向超出2S限值。

或同一控制品连续两批控制结果同方向超出2S限值。

属系统误差失控。;如扩增仪孔间温度的不均一性、孔内温度与所示温度的不一致性等。

板上杂交和膜上斑点印迹杂交的质控：在板上杂交和斑点杂交时，阳性和阴性质控应该在同一板或膜上与病人标本平行进行分析，这可排除不同反应中因使用不同杂交条件所致的对结果的错误解释。

有“标本采集时间、接收时间、检测时间、报告时间”信息

2）13S即这个控制值不仅超出2S控制线（符合12S规则），而且还超出了3S限值（符合13S规则）。

孔间温度的均一性（±1℃）（内部校准应规定测定孔的选择、测量时间、各孔温度偏差允许范围）

《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发[2010]194号）

41S四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。

4log10范围内，可接受

内部校准的辅助设备，实验室应根据国家计量部门或生产厂商的规定制定内部校准操作规程和要求，并有内部校准的详细记录

避免基因扩增检验假阴性结果的措施

接收的标本应收集在原始容器中，不能接受从其他检测如生化、免疫检验等分出来的标本，因其有较大的发生标本间污染的可能性

校准参数：光路部分、背景荧光、温控部分（温度准确度、均一性、温度升降速率）

更换试剂批号：试剂批间差，应评价核酸提取效率和扩增效率

与其他仪器的检测结果比较（5个样本，覆盖测量范围，至少4个样本测量结果偏移±7.

使用玻璃器皿，必须为密闭的、必须