细胞培养及其在肿瘤研究中的应用.pptVIP

细胞培养

及其

在肿瘤研究中的应用一、细胞培养基础知识概念细胞培养是在严格的无菌操作条件下，从机体组织分离出细胞，在体外用无菌的培养液及孵箱模拟机体的生理条件，进行细胞离体培养，使之存活和繁殖。其关键是要求严格的无菌和培养条件。培养细胞的特性细胞的生长方式及类型贴附生长型细胞能附着于支持物表面生长的细胞。上皮细胞型：形态类似上皮细胞的多种培养细胞，来源于外胚层及内胚层。成纤维细胞型：起源于中胚层。悬浮生长型细胞010203040506培养细胞的生长过程单个细胞的生长过程细胞周期：一个母细胞分裂结束后形成的细胞至其下一次再分裂结束形成两个子细胞的这段时期，可分为间期和M期（分裂期）两个阶段。细胞周期=间期+M期=G1期+S期+G2期+M期细胞系的生长过程01细胞系有限（生长）细胞系02原代培养或初代培养期为新鲜组织自体内取出后首次在体外培养至第一次传代的时间，一般约1-4周。原代培养是建立各种细胞系的第一步。原代培养的细胞刚刚离体，生物学特性未发生很大变化，仍具有二倍体遗传物性（二倍体核型）。原代培养的细胞与体内相应的细胞性状相似，更能代表其来源组织的细胞类型及组织特异性质，适合作药物测试、细胞分化等实验研究。01原代培养细胞部分生物学特征尚不稳定，如要做较为严格的对比性实验研究，还需对细胞进行短期传代后进行。02传代期（细胞系阶段）将原代细胞分开接种至2个或更多的新培养器皿中，即传代。每进行一次分离再培养为传一代。这种传代大约数天至1周左右即可重复一次，持续数月，此即细胞系。传代期的细胞增殖旺盛，一般仍然是二倍体核型，并保留原组织细胞的很多特征。衰退期01增殖变慢02停止分裂03传代中偶尔可有极少后代细胞能通过“危机期”，获得不死性而具有持久或无限增殖的能力，这种细胞即称为无限细胞系或连续（生长）细胞系。04每代细胞的生长过程细胞培养的基本设备和材料01细胞培养室的设置02无菌操作03孵育04制备05清洗06消毒灭菌处理07储藏08作台水平式或外流式垂直式或侧流式01碳培养箱02微镜03基本设备消毒的培养器皿玻璃培养瓶、培养皿塑料培养瓶、培养皿微载体涂膜材料中空纤维培养基培养液新生牛血清灭活处理：加温到56℃，30min%血清保护细胞10%血清细胞生长15%血清融合及克隆20%血清冻存细胞天然培养基：胎牛血清合成培养基：基本成分常用种类RPMI1640Eagle培养液（MEM）BME（BasalEagleMedium）DMEM（DulbccoMEM）培养用液水、平衡盐溶液、消化液、缓冲液、维生素液及用于检测的各种染液等。冻储存器010203肿瘤细胞培养和应用01细胞培养在肿瘤研究中的应用及意义02探索各种化学的、物理的和生物的因子03在肿瘤生命活动中的作用（单一的与综04合的作用）及过程。提供基础，便于在分子生物学水平上对细胞进行各项研究，尤其由于可获得纯的均一性细胞，故可进行分子杂交、电泳等研究。便于研究肿瘤细胞的结构和功能，尤其便于研究单个细胞的结构。其中包括扫描与透射电镜的研究。培养细胞可长期保存及传代，以便观察肿瘤细胞遗传行为的改变。观察研究肿瘤的生物学行为及机制，如侵袭转移。建立肿瘤细胞体外分化诱导模型。可用于快速筛选抗癌药物以及用于致癌物、促癌剂、抗促癌剂的研究。胞的取材和培养肿瘤细胞的取材实体瘤手术标本取材注意事项切取未经任何治疗和没有坏死的标本无菌操作处理标本及早浸入无血清培养液保鲜并及时进行培养液标本的取材标本取材以外周血中的肿瘤细胞为培养对象抗凝↓去除RBC↓离心↓悬浮培养适合于组织量少的原代培养。培养方法组织块培养法瓶。将组织剪切成小块后，接种于培养