生物制品的制备 (2).ppt

3、生物活性测定是保证基因工程药物产品有效性的重要手段，需要进行动物体内试验和通过细胞培养进行体外效价测定。重组蛋白质是一种抗原，可用放射免疫分析法或酶标法测定其免疫学活性。体内生物活性的测定要建立适合的生物学模型。体外生物活性测定的方法有细胞培养计数法、3H-TαR掺入法和酶法细胞计数等。第73页,共77页，星期六，2024年，5月4、稳定性检测稳定性检测是评价药品有效性和安全性的重要指标之一。5、产品一致性的保证第74页,共77页，星期六，2024年，5月1、液态保存（1）低温保存：液态蛋白质样品在-10～-20℃以下冰冻保存比较理想。（2）超低温保存：液氮超低温保藏（3）在稳定pH条件下保存：蛋白质较稳定的pH一般在等电点，因而保存液态蛋白质样品时，调到其稳定的pH范围内。第五节生物制品的保存与运输

第75页,共77页，星期六，2024年，5月（4）高浓度保存：一般蛋白质在高浓度溶液中比较稳定，这是因为液态蛋白质容易受水化作用的影响，保存时浓度不能太低，否则可能引起亚基解离和表面变性。（5）加保护剂保存：加入某些稳定剂可以降低蛋白质溶液的极性，以免变性失活。第76页,共77页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第77页,共77页，星期六，2024年，5月吸附法：这是利用吸附剂根据氨基酸吸附力的差异进行氨基酸分离的方法。苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分离就是利用活性炭对其吸附的原理。离子交换法：氨基酸是两性电解质，在一定pH条件下，不同氨基酸带电性质及解离状态是不相同的，因此在离子交换剂上被吸附的强度不同。常用的离子交换剂为强酸型阳离子交换树脂，洗脱主要用pH梯度洗脱。第41页,共77页，星期六，2024年，5月基因工程产物的特点：产物大多数处于细胞内，需进行细胞破碎产物浓度较低，杂质多，提纯困难产物多是大分子蛋白质，通常不稳定，易失活第三节基因工程制品的分离纯化方法第42页,共77页，星期六，2024年，5月1、含目的产物的起始物料的特点各种因素均对分离纯化技术和工艺有直接影响。这些因素包括：①菌种类型及其代谢特性。包括菌种的各种生物学性质，产物和副产物种类、产物在细胞内所处的位置，表达方式，代谢物种类，产物类似物、毒物和能降解产物的酶类等；一、影响分离纯化工艺设计的主要因素第43页,共77页，星期六，2024年，5月②原材料和培养基的来源及其质量；③生产工艺和条件。包括灭菌方法和条件，生产方式（连续、批式、半连续），生产周期，生产能力，工艺控制条件、因素及方式等；④初始物料的物理、化学和生物学特性。包括产物浓度、主要杂质种类和浓度、盐的种类和浓度、溶解度、pH、粘度、流体力学性质和热力学性质等。第44页,共77页，星期六，2024年，5月2、物料中杂质的种类和性质杂质种类和性质包括相关性和非相关性杂质的含量、化学性质、结构、相对分子量、电荷性质及数量、生物学特性、稳定性、溶解度、分配系数、挥发性、吸附性能等。第45页,共77页，星期六，2024年，5月3、目的产物特性产物特性主要有化学、物理和生物学特性，包括化学组成、相对分子质量、等电点、电荷分布及密度、溶解度、稳定性、疏水性、扩散性、扩散系数、分配系数、吸附性能、生物学活性、亲和性、配基种类、表面活性等。第46页,共77页，星期六，2024年，5月4、产品质量的要求产品质量标准和用途对产品纯度、生物活性、比活的要求。包括允许的杂质种类和最大允许含量，特殊杂质的种类和最大允许量，以及杂质对使用的影响，产品剂型、贮存稳定性等。第47页,共77页，星期六，2024年，5月二、分离纯化的基本过程分离纯化是极其重要的一环，这是由于工程菌经过大规模培养后，产生的有效成分含量很低，杂质含量却很高；另外由于基因工程药物是从转化细胞、不是从正常细胞生产的，对产品的纯度要求也高于传统产品。分离纯化要比传统产品困难得多。第48页,共77页，星期六，2024年，5月分离纯化一般不应超过4～5个步骤，包括细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品以及成品加工。第49页,共77页，星期六，2024年，5月发酵液细胞分离胞内产物胞外产物细胞破碎固液分离包含体细胞碎片分离变性复性浓缩初步分离高度纯化制剂产品一