液体菌种生产技术规程第7部分：羊肚菌.docxVIP

5生产技术

液体菌种生产技术规程第7部分：羊肚菌

1.范围

本标准规定了羊肚菌液体菌种生产基本要求、生产技术、工艺流程、液体菌种质量指标、贮藏、记录及生产档案等技术要求。

本标准适用于羊肚菌液体菌种生产。

2.规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB150.1压力容器第1部分：通用要求

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB5749食品安全国家标准生活饮用水卫生标准

GB50073洁净厂房设计规范

GB/T12728食品安全国家标准食用菌术语

NY/T528食品安全国家标准食用菌菌种生产技术规程NY/T1846食用菌菌种检验规程

NY/T1731食品安全国家标准食用菌菌种良好作业规范

3.术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4.生产基本要求

4.1工作人员

具有食用菌菌种生产能力的专业技术人员和检验人员。

4.2场地

生产场所应符合NY/T528的规定。环境卫生应符合NY/T1731的规定。

4.3厂房

厂房设计应符合NY/T528的规定。

4.4生产设施与设备要求

设备与设施应符合NY/T528的规定。液体种发酵罐质量应符合GB150.1的规定。

4.5培养原料

培养基原料应符合NY/T528的规定。生产用水标准应符合GB5749要求。

4.6生产品种

选用高产、优质、抗逆性强、商品性好的羊肚菌品种，从具相应资质的供种单位引种或本单位选育，并清楚地追溯菌种来源。菌种生产过程应符合NY/T528的要求。

51工艺流程

图1羊肚菌液体菌种工艺流程

5.2母种制备

5.2.1培养基配方

马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨4g/L,磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁1.5g/L，琼脂20g/L，pH自然。

5.2.2母种活化

母种活化操作流程应符合NY/T528要求。

将保存的初始菌种切割成直径4～6mm的菌丝块，接种到培养基中，18～20℃避光恒温培养4～6d，菌丝长满试管或者培养皿检验合格即可使用。

5.2.3母种质量检查

培养期间每天检查菌体生长情况，及时淘汰染菌或劣势菌种。菌丝长满管后按照NY/T1846规程进行检验，合格菌种进入生产流程。

5.3摇瓶液体菌种制备

5.3.1容器

使用无色专用玻璃菌种甁，可用棉塞、硅胶塞、专用封口透气膜封口。

5.3.2培养基配方

马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,蛋白胨4g/L,磷酸二氢钾3g/L,硫酸镁1.5g/L,pH自然。

5.3.3培养基配制

按液体培养基配方配制，混合均匀，装入摇瓶中，装液量为摇甁容量的50～60%，加入0.01%消泡剂，摇瓶中放置磁力搅拌棒，封口。

5.3.4灭菌

将分装好的摇瓶放入高压灭菌锅内进行灭菌，灭菌蒸汽压力升至0.11～0.13MPa，恒压维持25～30min。

5.3.5接种

待培养基冷却至25℃以下，在无菌条件下，用打孔器打孔（5mm孔径）或接种钩取（5mm×5mm）的4块活化母种块迅速转接于摇甁培养基内，封口。

5.3.6培养

摇瓶接种后移至恒温摇床中，培养温度18～20℃,转速150r/min，避光培养4～6d。

5.3.7摇瓶液体菌种质量要求

菌液澄清透明，菌丝体分布均匀，无异味；镜检无杂菌、菌丝形态正常。

5.4发酵罐液体菌种制备

5.4.1发酵罐空消

发酵罐初次使用、出现杂菌、长期放置及更换品种时，应进行空消灭菌。蒸气压力0.11~0.14MPa、恒压维持40min。

5.4.2培养基配方

宜选用以下配方，且培养基质应符合NY/T528要求。

马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨4g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁1.5g/L,pH自然。

5.4.3投料与定容

将原料、水按比例搅拌均匀，加入罐内，装液量为罐体容量的70～80%，加入0.01%消泡剂，拧紧上料口盖。

5.4.4发酵罐实消

液体种发酵罐内蒸汽压力控制在0.11～0.12MPa，恒压维持60～90min。

5.4.5冷却

灭菌结束，关闭空气过滤器灭菌阀与排气阀，缓慢打开夹套排气阀降压至0MPa，通入冷水降温；同时缓慢打开发酵罐罐内排气阀降压，待压力接近0.02～0.04MPa时向罐内通入无