第七章 高效液相色谱分析课件.ppt

7第七章高效液相色谱分析仪器分析第七章高效液相色谱法7第七章高效液相色谱分析7第七章高效液相色谱分析7第七章高效液相色谱分析学习目标1、掌握HPLC的分离原理、高效液相色谱分析的样品处理方法、分离方式的选择和定量分析方法及HPLC实验技术。2、了解高效液相色谱仪的构造、仪器各部分的功用及仪器的维护和保养，熟悉其工作过程及常用固定相及流动相的特性及选用原则。高效液相色谱分析法7第七章高效液相色谱分析一、液相色谱分离原理特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。液体待检测物被注入色谱柱，通过流动相推动，在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质以不同的顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。第一节高效液相色谱分离的原理1、液相色谱分析法7第七章高效液相色谱分析2、液相色谱法分类1）液-液分配色谱法（LLC）2）液-固吸附色谱法（LSC）3）离子交换色谱法（IC）4）空间排阻（凝胶）色谱法7第七章高效液相色谱分析1）液-液分配色谱法（LLC）分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异实现分离。固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）。缺点：系统内部压力大，易流失，不实用。极性固定液→NLLC，非极性固定液→RLLC正相色谱——固定液极性流动相极性（NLLC），极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱，适于分离极性组分。反相色谱——固定液极性流动相极性（RLLC），极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱，适于分离非极性组分。7第七章高效液相色谱分析2）液-固吸附色谱法（LSC）流动相为液体，固定相为固体吸附剂。分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异实现分离。3）离子交换色谱法（IC）分离机制：离子交换树脂上可交换的离子基团与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据其对离子交换树脂上的固定离子基团亲和力的不同而将溶质分子分离。离子对试剂：烷基磺酸钠→分析碱；四丁基季胺盐→分析酸4）空间排阻（凝胶）色谱法以凝胶为固定相的色谱法。分离机制：溶质自身体积大小不同，透过凝胶的速率不等。7第七章高效液相色谱分析高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。高效液相色谱也叫高压液相色谱（highpressureliquidchromatography）、高速液相色谱（highspeedliquidchromatography）、高分离度液相色谱（highresolutionliquidchromatography）等。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。二、高效液相色谱分析法的特点7第七章高效液相色谱分析1、高效液相色谱的特点高压——压力可达150～300kg/cm2。色谱柱每米降压为75kg/cm2以上。高速——流速为0.1～10.0mL/min。高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。7第七章高效液相色谱分析2、HPLC与经典液相色谱相比有以下优点速度快——通常分析一个样品在15～30min，有些样品甚至在5min内即可完成。分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。7第七章高效液相色谱分析三、HPLC的实际应用未知物质的鉴定与确认多成分的同时定量混合物的精制和分离测定物理化学常数HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。7第七章高效液相色谱分析第二节高效液相色谱仪的基本构造7第七章高效液相色谱分析高压输液系统进样系统分离系统检测系统数据处理系统高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。7第七章高效液相色谱分析一、高压