MISPE-LC-MS_MS法测定动物可食性组织中万古霉素残留及基质效应研究.pdf

摘要

万古霉素是一种糖肽类抗生素，对革兰氏阳性菌有比较强的抗菌作用，被认为

是对抗革兰阳性菌感染的最后一道防线，通常用于治疗甲氧西林金黄色萄球菌感染。

由于万古霉素优异的抗菌效果，在畜禽养殖过程中有可能被非法用作兽药和饲料添

加剂。人类食用含有万古霉素残留的动物源性食品将对人类健康造成危害，也会导

致耐药细菌的产生。研究灵敏、准确和可靠地测定万古霉素残留分析方法，对确保

动物源性食品质量安全具有重要意义。

本研究基于分子印迹固相萃取（Molecularimprintingsolidphaseextraction，

MISPE），结合液相色谱-串联质谱（Liquidchromatography-tandemmassspectrometry，

LC-MS/MS）技术，通过筛选前处理方法和优化色谱分离条件，建立了检测十种可食

性动物组织中万古霉素残留分析方法。采用PhenomenexC18色谱柱（150mm×2mm

i.d.，5μm）进行色谱分离，选择反应监测正离子模式进行分析，基质匹配标准内标

法进行定量。实验结果表明，在1~100ng/mL实验浓度范围内，目标分析物线性良好

（r＞0.99）；在1ng/g、2ng/g和10ng/g三个添加水平，目标分析物在十种可食性

动物组织中平均回收率在93.0％～117.5％之间，相对标准偏差小于12.1％；检测限

和定量限分别为0.4ng/g和1ng/g。

采用提取后添加法，将MISPE小柱净化前、后的相应基质匹配标准曲线与纯溶

剂标准曲线的斜率进行比较，评价LC-MS/MS测定万古霉素过程中的基质效应强弱。

方差分析结果表明，在猪肌肉、脂肪、肾脏、肝脏等四种可食性组织中，MISPE净

化前基质匹配标准曲线与纯溶剂标准曲线的斜率差异显著（P＜0.05），基质效应均

超过-20％，表现为强的基质抑制效应。然而，MISPE小柱净化后四种组织的基质效

应均在-10％以内，表现为弱的基质抑制效应。进一步采用柱后注射法分析动物组织

中的内源性磷脂对万古霉素特征离子响应信号的影响。研究结果表明，磷脂对万古

霉素的响应信号产生明显抑制作用，但基质提取液经MISPE小柱净化后可大大降低

磷脂对万古霉素信号的抑制作用。通过对猪肝提取液中5种代表性磷脂的监测，结果

表明，C16:0溶血磷脂酰胆碱是猪肝脏组织中抑制万古霉素信号强度的重要内源性基

I

质成分，磷脂可作为一种通用基质效应物用于补偿LC-MS/MS测定万古霉素残留过

程中的基质效应。

本研究基于MISPE结合LC-MS/MS技术开发了灵敏、准确和可靠的万古霉素残

留分析方法，可用于动物源性食品中万古霉素残留的日常监测、监管和风险分析。

关键词：万古霉素；分子印迹固相萃取；LC-MS/MS；动物可食性组织；基质效应

II

英文缩略词

英文缩略词英文全称中文名称

ACNAcetonitrile乙腈

AIBN2,2-Azobisisobutyronitrile偶氮二异丁腈

CECollisionenergy碰撞电压

CURCurtaingas气帘气压力

DPDeclusteringpotential去簇电压

EGDMAEthyleneglycoldimethacrylate乙二醇二甲基丙烯酸酯

EP