真菌的实验诊断.ppt

Aspergillusflavus-MicroscopicMorphology,100xLactophenolcottonblue黄曲霉菌(二列为主)分生孢子头、分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子Penicilliumspecies-ColonialMorphology,Sabouraudagar青霉属气生菌丝密毯状Penicilliumspecies-MicroscopicMorphology,400xLactophenolcottonblue青霉属(帚狀枝,分生孢子)Aspergillusniger-ColonialMorphology,Sabouraudagar黑曲霉菌(背面)Aspergillusniger-MicroscopicMorphology,100xLactophenolcottonblue(二列为主)分生孢子头、分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子*真菌体外药敏试验真菌体外药敏试验*K-B法E-test法MIC法010203抗真菌药物体外敏感试验*液基稀释法CLSIM27A2：致病性酵母菌CLSIM38A：产孢丝状真菌琼脂稀释法纸片扩散法——CLSIM44-AE－test法E-test法：可用于酵母样真菌和丝状真菌096*白色念珠菌近平滑念珠菌热带念珠菌光滑念珠菌近平滑念珠菌*白色念珠菌热带念珠菌光滑念珠菌近平滑念珠菌*白色念珠菌热带念珠菌光滑念珠菌近平滑念珠菌*白色念珠菌热带念珠菌光滑念珠菌近平滑念珠菌*白色念珠菌热带念珠菌光滑念珠菌近平滑念珠菌*白色念珠菌热带念珠菌光滑念珠菌体外抗真菌药敏试验与体内疗效*STEP1STEP2STEP3STEP490-60原则—MIC值与临床疗效药敏试验敏感菌株：90%对治疗有效药敏试验耐药菌株：60%对治疗有效MahmoudA.G,JCM1996,34:489-495；RexJ,CID2002,35:982-989真菌特异性抗原的免疫学检测*2半乳甘露聚糖3甘露聚糖1(1-3)-?-D-葡聚糖6新生隐球菌荚膜抗原5烯醇化酶4D-阿拉伯糖醇(1-3)-?-D-Glucan(葡聚糖)01“G”试验02(1-3)-?-D-Glucan生物活性(1-3)-?-D-Glucan作为真菌细胞壁成分之一，一旦进入机体后，将引起真菌病，严重时将会引起严重的深部真菌感染疾病，因此,深部真菌感染对患者的健康与生命构成严重威胁.传统检测方法为真菌培养，一是周期长，二是阳性率特别低．主要是抗生素类药物的滥用所引起．真菌感染出现逐渐上升趋势．“G”试验缘何而来？*比浊法反应机理*细菌内毒素 （1-3）?-D-Glucan1LAL-RM(反应物)2因子C 活化因子C3子B 活化因子B活化因子G 因子G4酶原 凝固酶?5原 凝固蛋白（凝胶）定量67G试验*0302011-3-β-D-Glucan葡聚糖存在于念珠菌、曲霉等的细胞壁中，能特异性激活G因子，从而激活鲎试验，此过程称为G试验。口咽部念珠菌病G试验结果阴性隐球菌,毛霉菌感染G试验假阴性(1→3)-β-D-葡聚糖检测*已在美国FDA以及一些欧洲国家得到批准应用范围：曲霉菌、念珠菌、镰刀霉、毛孢子菌、酵母菌、足分支菌是酵母菌及丝状真菌细胞壁上的一种成分内毒素检测方法隐球菌、毛霉菌除外(1→3)-β-D-葡聚糖检测*美国主要针对念珠菌血症进行了研究需要更多有关其它感染的研究信息（侵袭性曲霉菌病）没有真菌感染的患者血液中也会出现β-D-葡聚糖：血液透析使用血制品（白蛋白、丙球）使用含有葡聚糖的纱布临床上阳性结果出现较晚使用某种抗生素是否会导致假阳性？G试验商品化试剂盒*detectsinonehour天津滨海新区金山川公司生产产品Fungitec-Gglucan(Seikagaku)Obayashi1992cutoff：20pg/mlFungitellTMAssay(AssociatesofCAPECOD)cutoff：80pg/mlG试验假阳性问题*输注白蛋白或球蛋白1血液透析(纤维素滤膜）2输注抗肿瘤多糖类药物3使用磺胺类药物4外科手术后早期5标本接触纱布6?－D－葡聚糖的价