高致病性美人鱼发光杆菌美人鱼亚种PCR检测方法编制说明.docxVIP

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《高致病性美人鱼发光杆菌美人鱼亚种PCR检测方法》

编制说明

1.项目背景，包括产业现状、立项背景及必要性等。

本标准的提出是根据《中华人民共和国渔业法》、《关于创新体制机制推进农业绿色发展的意见》、《关于加快推进水产养殖业绿色发展的若干意见》、《水产养殖动物疫病防控指南》等国家政策文件对水产养殖绿色发展的要求，积极开发高效、精准并且可以现场应用的病害检测技术，对于支撑我国水产养殖病害综合防控技术体系建设和推进水产养殖业绿色高质量发展具有重要意义。

美人鱼发光杆菌美人鱼亚种（Photobacteriumdamselaesubsp.damselae，PDD）是弧菌科发光杆菌属美人鱼发光杆菌（Photobacteriumdamselae）的一个亚种，广泛分布于全球海洋环境中，可以感染鱼类、甲壳类、软体动物、海龟、鲸豚类等不同的海洋动物发病，对人也有一定的致病性。PDD首次分离于1971年发生的一起“未知海洋弧菌”感染人类伤口的事件。而后，该菌于1981年再次从患病斑鳍光鳃鱼（Chromispunctipinnis）的皮肤溃疡病灶处被分离出来，被命名为美人鱼弧菌（Vibriodamsela），并报道于Science杂志。20世纪90年代，Smith等人将其归为发光杆菌属，并重新命名为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种，与鱼类巴斯德氏菌病的病原美人鱼发光杆菌杀鱼亚种（P.damselaesubsp.piscicida）同种。PDD不仅是多种海水养殖动物的病原，还可对人类导致机会性感染。鱼类在感染PDD之后的典型特征为局部出血和体表溃疡性损伤，而人类伤口在感染PDD之后，往往会形成大疱和明显的水肿，并且有可能发展为坏死性筋膜炎，多器官衰竭。根据现有的文献报道，PDD主要是因鱼刺、鱼钩和水中杂物（如木块）等扎伤后接触伤口而感染人。该菌在近海海水环境中广泛分布，不仅会感染养殖动物发病从而对养殖生产造成经济损失，还会对海水养殖从业者、海滨浴场游客、海上工程作业人员等构成一些潜在的公共卫生风险，应引起足够的重视

PDD的致病性主要由四种不同的毒素决定，分别是由毒力质粒pPHDD1编码的damselysin（Dly）和phobalysinP（PhlyP），以及由染色体编码的phobalysinC(PhlyC)和磷脂酶PlpV。其中Dly由毒力基因dly编码，是一种对鞘磷脂表现高活性的D-磷脂酶；PlpV由毒力基因plpV编码，是一种A2-磷脂酶；PhlyP和PhlyC都是穿孔毒素，分别由毒力基因hlyApl和hlyAch编码，这四种毒素都通过II型分泌系统分泌。穿孔毒素PhlyP与PhlyC之间的加强作用，以及两种磷脂酶（Dly和PlpV）与两种穿孔毒素（PhlyP和PhlyC）之间的协同作用可以使菌株对鱼类的致病力达到最大。此外，PDD菌株的染色体还能编码一种胶原酶ColP，这种毒素对菌株的致病性起次要作用。而在诸多致病因子中，携带dly基因是决定PDD对鱼类致病性强弱的主要毒力基因。

到目前为止，我国境内PDD感染海水养殖动物的文献报道集中于少量的发病案例和病原学报道，该菌被认为是我国海水养殖产业近几年的新发病原之一。从已有的研究看，PDD可以感染我国从南方至北方的多种海水经济动物，如鞍带石斑鱼（Epinepheluslanceolatus）、半滑舌鳎（Cynoglossussemilaevis）、许氏平鲉（Sebastesschlegeli）、凡纳滨对虾（Penaeusvannamei）等，没有表现出明显的地域或宿主特异性。以山东省长岛海洋生态文明综合试验区周边海域为例，该海域是我国北方最大的深水网箱养殖区，现有中大型深水网箱738个，海水网箱总养殖水体达到63万m3。，主养品种为许氏平鲉，年养殖产量在1000吨左右。但近10年来，该地区网箱养殖的许氏平鲉连续在高温季节暴发流行性的皮肤溃疡病，该病具有传播速度快、致死率高等显著特点，发病期间单口网箱的累计死亡率最高超过了60%（数据来源于长岛海洋生态文明综合试验区海洋经济促进中心的调研报告），导致约30%的网箱养殖业主近几年放弃养殖、空置网箱，经济损失惨重。本标准起草人在该地区针对该病进行了连续两年的系统性流行病学调查，不仅充分证实PDD是该病的致病原，也从这一养殖海区不同养殖时期陆续分离获得了11株PDD菌株。后续的病原学研究结果表明，这11株菌株和本实验室保存的其他来源的PDD菌株不仅生理生化指标、抗生素药物敏感性等常规表型指标存在较明显的差异，与致病力紧密相关的溶血能力也表现了非常明显的差异。多次人工感染实验也验证，这些菌株对许氏平鲉的致病力也存在极为明显的差异。同为高浓度的活菌液注射感染，致病力强的菌株可以导致实验鱼在极短的时间内就全部死亡，而