高效表达抗菌肽PMAP-37(F34-R)的酵母菌株构建及其生物学特性和应用研究.pdf

摘要

由于抗生素的耐药性和安全性问题，寻找传统抗生素的替代品成为近年来的研

究热点。抗菌肽是调节免疫激活的小分子生物活性肽，具有抗菌活性，降低细菌耐

药性的风险。猪髓系抗菌肽37(PMAP-37)来源于猪骨髓，PMAP-37(F34-R)是依据

PMAP-37374.374kDa

的原始序列改造的类似物。它由个氨基酸组成，分子量为，

具有90%以上的α螺旋。

为了获得高效表达PMAP-37(F34-R)的毕赤酵母(Pichiapastoris)菌株，我们构建

了重组PMAP-37(F34-R)的质粒(pPICZα-PMAP-37(F34-R)-A)，并将其导入毕赤酵母

基因组。经过对酵母表达诱导条件的优化研究，发现在甲醇浓度为1.5%时，最佳表

达时间为5d，此时上清液中目的蛋白含量最多。

在上述基础上，我们获得了一种活性较高的重组肽PMAP-37(F34-R)，它可以抑

制革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的活性。抑菌圈实验表明，PMAP-37(F34-R)对金黄

色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、李斯特菌和枯草芽孢杆菌抑制效果较好，对大肠埃希

和大肠O157抑制效果较弱。MIC结果表明，PMAP-37(F34-R)最低抑菌浓度在0.12~

0.24μg/mL之间。对PMAP-37(F34-R)进行稳定性研究，发现其对于不同温度、不同

pH值以及不同蛋白酶处理下均具有很强的耐受性，在高温90℃、强碱(pH10)及胰

蛋白酶处理下的活性略受影响，其他条件均维持良好的稳定性。此外，溶血实验显

示PMAP-37(F34-R)对人体红细胞具有较低的溶血能力。在抑菌机制相关研究中，对

PMAP-37(F34-R)进行扫描电镜及细胞膜渗透性实验，结果显示PMAP-37(F34-R)能破

坏细胞膜完整性，导致细菌死亡。最后，将PMAP-37(F34-R)应用于水果的防腐保鲜。

结果表明，在30℃的高温条件下，经PMAP-37(F34-R)处理的李子腐烂率和失重率整

体低于对照组，并且削减了李子的呼吸强度。

综上所述，PMAP-37(F34-R)是一种很有前途的水果保鲜剂候选者，其具有良好

的抑菌性能并且对人体红细胞伤害较低，这些优点使其在开发新的绿色防腐剂中具

有潜在的应用价值。

关键词：抗菌肽；PMAP-37(F34-R)；抑菌性能；抑菌机制；防腐

ABSTRACT

Thesearchforalternativestotraditionalantibioticshasbecomeahotresearchtopicin

recentyearsduetotheresistanceandsafetyissuesofantibiotics.Antimicrobialpeptidesare

smallmoleculebioactivepeptidesthathaveantibacterialactivity,reducingtheriskof

bacterialresistance.Porcinemyeloidantimicrobialpeptide37(PMAP-37)isderivedfrom

porcinebonemarrow,PMAP-37(F34-R)isananaloguebasedontheoriginalsequenceof

PMAP-37.Itconsistsof37aminoacids,hasamolecularweightof4.374kDa,hasmore

than90%alphahelix.

InordertoobtainastrainofPichiapastoristhatexpressesPMAP-37(F34-R)

efficiently,weconstructedarecombinantPMAP-37(F34-R)plasmid(pPICZα-PMAP-

37(F34-R)-A)andintroduceditintothePichiagenome.Aftertheoptimi