日本三角涡虫贯穿伤愈合过程中伤口极性变化及对愈合的影响.pdfVIP

摘要

日本三角涡虫（Dugesiajaponica）隶属于扁形动物门（Platyhelminthes）,涡虫纲

（Turbellaria）,因其极强的再生能力，成为研究再生及损伤修复机制的模式动物之一。

涡虫的再生具有强烈的极性，在没有人为干预的条件下，再生片段的前端永远形成头，

后端永远形成尾。初步研究表明，涡虫内部两端不完全断裂切割形成的贯穿伤并不会像

头、尾切割那样再生出头和尾，仅形成伤口愈合，其机制并不清楚。本研究以日本三角

涡虫为模型，用微型手术制造咽前贯穿伤，采用形态学比较、原位杂交、RNAi和qRT-PCR

技术对伤口极性及其对伤口愈合的影响进行研究。

研究内容包括：

（1）伤口的极性及变化。以极性标志分子Djwnt1和Djnotum为探针，用原位杂交

方法检测伤口愈合过程6个时间点(3h、6h、12h、18h、24h和48h)的极性及极性变

化。

（2）极性对伤口愈合的影响。通过RNAi分别干扰Djwnt1和Djnotum基因，在

qRT-PCR确定干扰效果后，观察和比较上述6个时间点伤口愈合状态。

（3）极性分子干扰对伤口芽基形成的影响。以芽基标志基因DjmkpA为探针，观察

极性对伤口芽基形成的影响。

主要研究结果如下：

（1）贯穿伤的极性与极性变化。前（Djnotum）后(Djwnt1)极性标志分子原位杂交

显示：日本三角涡虫贯穿伤在愈合过程中，伤口前后缘分别出现Djwnt1和Djnotum阳

性杂交信号，均在伤口形成后6h出现。Djnotum在18h信号最强，48h信号消失；Djwnt1

在24h信号最强，48h信号消失。

（2）极性分子干扰对贯穿伤愈合的影响。通过RNAi分别对Djnotum和Djwnt1进

行干扰，qRT-PCR检测表明，干扰后二基因转录水平极显著降低；原位杂交表明贯穿伤

伤口前后缘均无杂交信号。形态学观察发现，在贯穿伤形成后6h伤口基本愈合，与对

照组未干扰并无差异，表明极性分子干扰并不影响贯穿伤的愈合。

（3）极性分子干扰对伤口芽基形成影响。分别对Djnotum和Djwnt1进行干扰，两

实验组贯穿伤伤口在3h均出现DjmkpA阳性杂交信号，与对照组阳性信号出现时间相

同，但强度明显较未干扰组对照组弱，伤口愈合进程与对照组无显著差异。因此，尽管

Djnotum与Djwnt1干扰后，贯穿伤芽基形成强度减弱，但并不影响伤口的愈合进程。

综上所述，日本三角涡虫贯穿伤愈合过程伤口前后缘存在极性，极性并不影响伤口

的愈合进程。伤口前后缘极性的变化与头、尾处极性的并不同步。伤口前后缘接触后，

伤口处极性杂交信号明显减弱。上述研究为进一步提示日本三角涡虫伤口愈合与再生机

制提供了基础。

关键词：日本三角涡虫，贯穿伤，伤口极性，伤口愈合

Abstract

DugesiajaponicabelongstothePlatyhelminthesphylumandtheTurbolariaclass.Duetoitsstrong

regenerationability,ithasbecomeoneofthemodelanimalsforstudyingregenerationanddamagerepair

mechanisms.Theregenerationofplanarianshasastrongpolarity,andwithouthumanintervention,the

frontendoftheregenerationfragmentalwaysformsaheadandthebackendalwaysformsatail.

Preliminarystudieshaveshownthatthepenetratingwoundsformedbyincompletefractureandcuttingof

bothends