核酸的生物学功能课件.pptVIP

2.轉基因動物與動物克隆（1）轉基因動物

（2）體細胞克隆—無性繁殖1982年，人們將大白鼠的生長激素基因放在質粒中小白鼠金屬巰基蛋白啟動子之後。將重組好的這種質粒，用特製的微量注射器注入小鼠受精卵的雄性原細胞核中，再將這個受精卵植入小鼠子宮中。（1）轉基因動物啟動子結果為發育成熟的小鼠體重比對照小鼠大兩倍，成為“碩鼠”或“超級鼠”。1986年，美國製備出轉生長激素基因的豬。這種豬生長快，飼料轉換率和瘦肉率顯著提高而肥膘低，與注射生長激素的效果相同。我國現製備出轉基因豬、羊、兔等。然而，轉生長激素基因的豬生殖能力明顯下降，不能繁殖擴群。1996年7月世界第一例從成年動物體細胞，克隆出的哺乳動物綿羊“多利”誕生。1997年2月Nature雜誌報導將這個秘密向世人公佈。（2）體細胞克隆—無性繁殖克

隆

羊

多

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產

生

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程*基因重組與基因工程（一）重組DNA技術的基礎重組DNA技術的定義在體外，將一種外源DNA和載體DNA重新組合連接，形成雜交DNA，然後將其轉入宿主細胞，最終使外源DNA在宿主細胞中隨著宿主細胞的繁殖而增殖和表達,從而改變生物原有遺傳性狀的過程，稱為重組DNA技術。它是按生物科學規律，在體外人為的改造基因，最終往往使生物的遺傳性狀獲得改變，故又稱為“遺傳工程”，亦即“基因工程”。1.重組DNA技術的基礎(1)重要的工具酶(2)載體（1）重要的工具酶它能夠識別、切割雙鏈DNA分子中的特定序列，這些特定序列多數為反向重複序列，一般長度是4、5或6bp。①限制性內切酶①粘性末端如EcoRI:5’---GAATTCCTTAAG---3’②平齊末端如HaeIII:5’---GGCCCCGG---3’PGAATTCQPCTTAAGQXGAATTCYXCTTAAGYAATTCQPGPCTTAAGQXGAATTCYXCTTAAGYPCTTAAPGAATTCYGYXCTTAAXGGQAATTCQEcoR1限制性酶酶切片段退火與DNA連接酶連接②DNA連接酶目前使用的連接酶有兩種：大腸桿菌DNA連接酶黏性末端連接；T4連接酶黏性和平齊末端連接。（2）載體概念能將外源DNA帶入宿主細胞，進行複製擴增或最終使外源基因得以表達的自主DNA，稱為載體（vector）。分類①克隆載體用於基因的複製、擴增、測序等；②表達載體用於目的基因的表達。（二）重組DNA技術的基本操作過程1.目的基因的獲得2.選擇和製備載體3.將目的基因與載體進行切割連接4.將重組體導入受體細胞5.陽性克隆的篩選和鑒定6.DNA重組體的擴增、表達等研究重組DNA技術的基本操作過程1.目的基因的獲得（1）提取DNA後，PCR體外特異擴增（2）以mRNA為範本，反轉錄合成cDNA。（3）化學合成基因（4）限制性內切酶從載體上切取（5）構建基因文庫，調取目的基因2.載體的選擇和製備原核生物常用的載體：質粒和噬菌體；真核生物常用的載體：動物病毒、酵母；穿梭載體：通常是指那些既能在真核細胞中繁殖又能在原核細胞中繁殖的載體。目的基因與載體的酶切與連接3.4.重組DNA導入宿主細胞大腸桿菌、酵母、真菌及各