食品中常见病原菌微生物检验技术.ppt

3．肠毒素的测定动物试验可用检样稀释液直接作动物试验或按以下方法将分离菌株培养制备肠毒素。①肠毒素的制备：肠毒素的制备有固体培养法和液体培养法。②肠毒素测定：注射前应先喂给幼猫少量的食物，以便观察反应。取上清液按幼猫体重每100g1mL的剂量腹腔注射或加大2—3倍量口服。然后仔细观察，一般攻毒后0．5～2小时内幼猫发生呕吐、腹泻、体温上升、畏寒等症状，经4～5小时后逐渐恢复。同时实验时用未接种菌的培养基做同样处理的阴性对照。第95页，共142页，星期日，2025年，2月5日第三节志贺氏菌检验技术志贺氏菌属（shigella）是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌。通常志贺氏杆菌(Bacillus，shigae)仅指I型痢疾志贺氏菌。志贺氏杆菌是日本志贺诘在1898年首次分离得到的，因此而得名。第96页，共142页，星期日，2025年，2月5日本属细菌对理化因素的抵抗力较其他肠道杆菌为弱。对酸敏感，在外界环境中的抵抗力能以宋内氏菌最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。一般56-60℃经10分钟即被杀死。在37℃水中存活20天，在冰块中存活96天，蝇肠内可存活9-10天，对化学消毒剂敏感，1%石碳酸15-30分钟死亡。第97页，共142页，星期日，2025年，2月5日志贺氏菌属有四个血清组，即A。B、C、D。(1)A群:又称痢疾志贺氏菌。不发酵甘露醇。有12个血清型，其中8型又分为三个亚型。（2）B群：又称福氏志贺氏菌。发酵甘露醇。有15个血清型（含亚型及变种），抗原构造复杂，有群抗原和型抗原。根据型抗原的不同，分为6型。（3）C群：又称鲍氏志贺氏菌。发酵甘露醇，有18个血清型，各型间无叉反应。（4）D群：又称宋内氏志贺氏菌。发酵甘露醇，并迟缓发酵乳糖，一般需要3～4天。只有一个血清型。引起食物中毒的主要是福氏志贺氏菌和宋内氏志贺菌。第98页，共142页，星期日，2025年，2月5日一、生物学特性1．形态特性本属细菌为两侧平行、末端钝圆的革兰氏阴性杆菌短杆菌。无芽胞，无荚膜，无鞭毛。多数有菌毛。与肠杆菌科各属细菌的主要区别为不运动。第99页，共142页，星期日，2025年，2月5日分解葡萄糖，产酸不产气。大多数不发酵乳糖。vp试验阴性，不分解尿素，不形成硫化氢，不能利用枸橼酸盐作为碳源。第100页，共142页，星期日，2025年，2月5日第二法Baird-Parker平板法检验程序定量检测（平板法）适用于检测金黄色葡萄球菌数不小于10/g（mL）的食品第63页，共142页，星期日，2025年，2月5日25g样品+225ml生理盐水选三个连续梯度，每个梯度分别取1mL接种之至表面干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL）平板计数（分别记录每种类型的菌落数）36±1℃48hr镜检营养肉汤血浆凝固酶实验报告结果金葡菌数/g(mL)定量检测（平板法）每种类型至少选取一个菌落36±1℃24hr36±1℃6hr适用于检测金黄色葡萄球菌数不小于10/g（mL）的食品梯度稀释第64页，共142页，星期日，2025年，2月5日第三法金黄色葡萄球菌MPN检验程序定量检测（MPN法）第65页，共142页，星期日，2025年，2月5日25g样品+225ml生理盐水选三个连续梯度，每个梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉汤36±1℃45-48hrBP平板血浆凝固酶实验查MPN表定量检测（MPN法）36±1℃45-48h报告结果适用于检测可能含有少量金黄色葡萄球菌，却带有大量竞争菌的样品梯度稀释第三法金黄色葡萄球菌MPN检验程序第66页，共142页，星期日，2025年，2月5日金黄色葡萄球菌的检测－－测定方法国标方法注意事项现象观察：染色镜检（形态、染色）表面光滑的菌落，菌落色素不稳定，但多数为金黄色。Baird-Parker琼脂平板（BP平板）、血平板、血浆凝固酶试验多数产肠毒素的菌株在血琼脂平板上能形成溶血圈，并能产生血浆凝固酶，这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。第67页，共142页，星期日，2025年，2月5日四、操作方法1.增菌培养法（1）检样处理将25g（mL）检样加于225mL灭菌生理盐水中的灭菌器内，制成1：10检样混悬液。（2）增菌培养吸取液体检样5