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红象草中花青素提取技术规程

1范围

本文件规定了红象草中花青素提取技术的术语和定义、仪器设备、原料要求、提取工艺、检验方法、贮藏管理等技术。

本文件适用于实验室中红象草中花青素的提取。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T2640植物源性食品中花青素的测定高效液相色谱法

3术语和定义

3.1红象草PennisetumpurpureumSchumab

红象草(PennisetumpurpureumSchumab)为多年生禾本科狼尾草属(Pennisetum)，茎叶为紫红色，又叫紫狼尾草、紫象草。

3.2花青素anthocyanins

是深红色、紫色或蓝色植物中广泛存在的一类水溶性黄酮类天然色素，是花色苷水解而得的有颜色的糖苷衍生物。

4试剂

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，提取用水应符合GB/T6682中三级水的要求。

4.1无水乙醇。

4.2盐酸：优级纯，纯度为35%～37%。

4.350%酸性乙醇（1%盐酸酸化处理，pH=2）

5仪器设备

5.1天平（感量0.01g)。

5.2组织捣碎机。

5.3超声波仪。

5.4真空冷冻干燥机。

5.5旋转蒸发仪。

6原料要求

6.1原料刈割时期

刈割高度为1.5m～2.5m的红象草

6.2原料管理

6.2.1原料存储过程中防止雨淋、霉变、污染和鼠（虫）害。

6.2.2原料储存时间不超过1周，储存条件应遮阳、通风。

6.3原料预加工

6.3.1清除原料中金属、石块、塑料等异物。

6.3.2原料提取前应进行粉碎处理，长度不宜超过50mm。

7提取工艺

7.1工艺流程

红象草中花青素提取工艺流程，

红象草→粉碎→粗提→过滤→浓缩→冻干→花青素。

7.2原料制备

红象草经组织捣碎机捣碎、混匀，置于-18°C以下密封保存备用。

7.3提取

按料液比49:1，称取粉碎后的红象草样品，量取相应量的50%酸性乙醇，于50°C超声波仪（功率480W，频率50KHz）中超声提取30min，过滤，4000rpm离心5min，上清液转入圆底烧瓶，重复上述操作1次，合并提取液。

7.4浓缩

提取液于50°C水浴下旋转蒸发仪上减压浓缩，待冷凝器无液滴滴下，收集浓缩液。

7.5纯化

用有机溶剂（如乙酸乙酯）萃取花青素，去除水溶性杂质。使用硅胶柱或C18反相柱，用不同极性的溶剂洗脱，分离花青素。

7.6冻干

将浓缩液置于冷冻干燥机中，在真空度100Pa，温度-45°C条件下冻干24h，得到冻干物为红象草花青素提取物。

8检验方法

应符合附录A的规定。

9贮藏管理

干品应密封后置于-18°C下避光贮存或者在冷库内避光贮存。贮藏场所应保持清洁、干燥，防虫、防鼠。

附录A

（规范性）

花青素的测定

A.1范围

本文件规定了红象草原料及提取液中飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素共6种花青素的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于红象草原料及提取液中花青素含量的测定。

本标准的检出限：以称样量为1g，定容体积为50mL计，飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素5种花青素的方法定量限均为0.5mg/kg；矮牵牛色素的方法定量限为1.5mg/kg。

A.2原理

红象草中的花青素主要以花色苷的形式存在。试样经乙醇一水的强酸溶液超声提取花色苷后，经水浴后将花色苷水解成花青素，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。

A.3试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，检测用水应符合GB/T6682中一级水的要求。

A.3.1无水乙醇(C2H5OH)：色谱纯。

A.3.2甲酸(CH2O2)：色谱纯。

A.3.3甲醇(CH3OH)：色谱纯。

A.3.4盐酸(HCl)：优级纯，纯度为35%～37%。

A.3.5提取液：无水乙醇+水+盐酸=1+1+0.01(V+V+V)，取100mL无水乙醇、100mL水和1mL盐酸混匀。

A.3.610%盐酸甲醇溶液(体积比)：取10mL盐酸、90mL甲醇混匀。

A.3.7飞燕草色素(Delphinidin)：CAS号528-53-0，纯度≥96%。

A.3.8矢车菊色素(Cyanidin)：CAS号528-58-5，纯度≥98%。

A.3.9矮牵牛色素(Petunidinchloride)：CAS号1429-30-7，纯度≥96%。

A.3.10天竺葵