文献解析 穿孔素（Perforin）Perforin-2在交叉呈递树突细胞中的内吞逃逸作用.pdf

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文献解析|穿孔素（Perforin）Perforin-2在交

叉呈递树突细胞中的内吞逃逸作用

穿孔素（Perforin）

引言

穿孔素（Perforin）作为一种关键的免疫分子，在细胞介导的杀伤作用中起着至关重要的作用。近年来，关于穿孔素的研究不断深入，

尤其是其在树突细胞（DendriticCells,DCs）交叉呈递抗原过程中的角色引起了广泛关注。本文将对一篇题为《Perforin-2isa

pore-formingeffectorofendocyticescapeincross-presentingdendriticcells》的文献进行深度解析，以探讨穿孔素-2（Perforin-2）

在抗病毒和抗肿瘤T细胞介导的免疫应答中的重要作用。

文献背景

在抗病毒和抗肿瘤T细胞介导的免疫应答启动的过程中，树突细胞（DCs）负责在主要组织相容性复合体（MHC）I类分子上交叉

呈递外源性抗原。交叉呈递是一种特殊的免疫过程，通过这一过程，树突细胞能够将外源性抗原转化为内源性形式，并呈递给T细胞，

从而引发适应性免疫反应。这一过程的实现依赖于树突细胞内囊泡的“泄漏”，即内化的蛋白质逃逸到胞浆中，并由蛋白酶体介导产生

MHCI结合多肽。

传统上，1型树突细胞（Type1conventionalDCs）被认为在交叉呈递方面表现出色。然而，关于这一过程中细胞类型特异性的效

应因子的研究相对较少。因此，有必要寻找并鉴定这些效应因子，以更深入地理解交叉呈递的分子机制。

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研究目的

本文的研究旨在通过遗传筛选和鉴定，找到一种专门参与树突细胞交叉呈递的效应蛋白，并探讨其在抗原进入胞浆过程中的作用。

研究方法

.实验设计：作者设计了一种适合遗传筛选的检测方法，该方法利用流式细胞术监测单个细胞的逃逸过程。通过CRISPR-Cas9

技术，作者对交叉呈递的传统1型树突细胞进行了筛查，以期找到参与内吞逃逸的效应蛋白。

.实验材料：实验使用了28kDa的I型核糖体失活蛋白（RIP）皂苷作为探针，该蛋白一旦进入细胞质，就会通过去除核糖体

28S亚基中的arcin-ricin环来阻止翻译。同时，作者还使用了Atto550标记和未标记的皂苷混合物，以监测细胞逃逸的情况。

.数据分析：通过流式细胞术和自动成像技术，作者对实验结果进行了详细分析，包括翻译速率的测定、细胞毒性的评估以及

逃逸效率的测量等。

研究结果

.穿孔素-2的鉴定：通过CRISPR-Cas9筛选，作者发现Mpeg1（编码穿孔素-2）是细胞内逃逸的调节因子。Mpeg1缺失的

小鼠未能有效地激活CD8+T细胞对细胞相关抗原的反应，这表明穿孔素-2在交叉呈递过程中抗原进入胞浆中起着重要作用。

.穿孔素-2的成孔作用：穿孔素-2是膜攻击复合体（MAC）和穿孔蛋白超家族（MACPF）的成员，能够在脂质体上形成低聚

孔。作者通过突变分析发现，穿孔素-2的成孔能力是其介导细胞内逃逸所必需的。

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.穿孔素-2在交叉呈递中的功能：作者进一步验证了穿孔素-2在树突细胞交叉呈递过程中的功能。通过转导Mpeg1ko细胞（带

有全长sgRNA抗性Mpeg1），作者发现穿孔素-2的异位表达足以促进非免疫细胞的胞内逃逸，从而证实了其在交叉呈递中的关键作用。

结果讨论

.穿孔素-2的成孔机制：穿孔素-2通过MACPF结构域中的两个螺旋的齐聚和解旋形成孔。这一成孔过程对于抗原从内吞囊泡

逃逸到胞浆中是至关重要的。作者通过突变分析验证了这一机制，并发现