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IFCC参考方法采用L-?-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺(GCNA)作为底物，以甘氨酰甘氨酸（双甘肽）作为?-谷氨酰基的受体。在pH7.7的条件下，?-GT催化底物生成?-谷氨酰双甘肽和黄色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，在410nm波长处直接连续监测，吸光度的增高速率与?-GT活性成正比关系。返回节GGT测定的临床意义(1)胆道疾病胆石症、胆道炎症、肝外梗阻等升高明显。(2)肝实质疾病肝炎、脂肪肝、肝硬化时中度升高。慢性肝炎活动期GGT多增高，非活动期则多正常。原发性或转移性肝癌时不同程度的增高。(3)诱导作用对乙醇性中毒的判断有一定的价值。长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者升高。(4)同工酶用醋酸纤维薄膜电泳可将GGT同工酶分为GGT1、GGT2、GGT3和GGT4四种，正常人只有GGT2和GGT3。重症肝胆疾病和肝癌时有GGT1出现；乙醇性肝坏死、胆总管结石及胰腺炎时GGT2增加；GGT4与胆红素增高相关。返回节三、肌酸激酶及其同工酶生化特性肌酸激酶为巯基酶，易受金属离子Ca2＋、Cu2＋、Zn2＋、Mn2＋等的抑制，Mg2＋是CK的必需激活剂。由两种不同亚基（M和B亚基）组成的二聚体。按电泳速率的快慢分为：CK-BB（CK1）、CK-MB（CK2）、CK-MM（CK3）和CK–Mt(CK4)四种同工酶。组织分布广泛分布于全身，骨骼肌含量最高，其次是心肌和脑组织。CK-BB在脑和脊髓内含量最高称为脑型同工酶。分为氧化型、中间型和还原型3种亚型。CK-MB主要存在于心肌细胞内称为心型同工酶。分为CK-MB1\CK-MB2亚型。骨骼肌中几乎全部为CK-MM，称为肌型同工酶。分为CK-MM1\CK-MM2\CK-MM3亚型。返回节CK的测定方法有比色法、紫外分光光度法和荧光法等。由于以磷酸肌酸为底物的逆向反应速度快，约为正向反应速度的6倍，所以采用逆向反应进行测定较为普及。如肌酸显色法和酶偶联法，其中以后者最常用，有两种工具酶及指示酶参与反应。IFCC测定CK的参考方法为酶偶联法。返回节CK同工酶和亚型的测定方法临床常规测定CK同工酶多用电泳和免疫抑制法，但二法均会受溶血和巨CK的干扰，免疫抑制法还会受到CK-BB的干扰。现推荐用免疫化学方法直接测定CK-MBmass，可不受溶血和巨CK的干扰。CK同工酶亚型（CK-MM亚型和CK-MB亚型）多用琼脂糖凝胶高压电泳和等电聚焦电泳等。返回节二、同工酶的分析方法方法同工酶(或亚型)的性质差异同工酶、亚型电泳法电荷不同所有同工酶、亚型层析法(离子交换层析、亲和层析)电荷不同CK，LD，ALP免疫分析法免疫抑制法特异性抗体反应性不同CK、LD、ACP免疫化学测定法特异性抗体反应性不同CK、LD、ACP、ALP、AMY动力学分析法底物特异性分析法底物Km、亲和力不同ACP、CK、LD（?-羟丁酸）抑制剂分析法对小分子量的抑制剂的特异性抑制不同LD（草酸）、ACP（L-酒石酸）、ALP（L-苯丙氨酸）pH分析法最适pH不同AST热失活分析法热稳定性不同ALP蛋白酶水解法对蛋白水解酶敏感度不同LD、AST返回节0102电泳材料：醋酸纤维素薄膜、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、等电聚焦及毛细管电泳等。区带显色：各同工酶区带进行酶促反应显色后，扫描定量，而颜色的深浅与同工酶活性成正比。巨分子酶产生的原因：酶与免疫球蛋白形成复合物，如CK-BB-IgG。酶与其他蛋白质形成复合物，如LD-β-脂蛋白。酶亚基或分子之间形成聚合物，如CK-Mt聚合物、LD亚基自身聚合等。返回节电泳法层析法：利用同工酶分子量大小、所带电荷多少的不同，以及受某些离子交换剂吸附的强弱程度不同来进行分离鉴定的方法。柱层析，如离子交换层析和亲和层析等。因操作方法费时繁琐，一般不用于临床同工酶常规检测，而主要用于同工酶的分离、制备、纯化。01层析法02返回节03免疫抑制法根据同工酶的某一种亚基与相应的抗体结合后，酶活性受到抑制，可算出该型同工酶的活性。如CK-MB活性测定。免疫沉淀法该法利用同工酶抗体形成抗原抗体复合物沉淀的原理，减去法可算出同工酶的活性。其他免疫学方法测定酶蛋白利用酶是蛋白类抗原但含量极微