转基因黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因的克隆及表达.pptVIP

转基因黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因的克隆及表达制片：何颖舒冬梅王惜韩可以操作目的：采用RT-PCR技术，从黑曲霉的菌丝体RNA中扩散出葡萄糖淀粉酶GAT的结构基因，将其转接到pPIC9载体中，转入巴斯德毕赤酵母GS115中，获得重组酵母，使重组酵母中的葡萄糖淀粉酶活增高。基因载体：pPIC9操作方法：引物设计，根据已知的黑曲霉葡萄糖淀粉酶一基因序列和表达载体，pPIC9的克隆位点，利用DNAsis设计一对扩增葡萄糖淀粉酶一基因的引物，上游引物为5’-TACGTAGCGACCTTGGATTCATGGTT--3’,带有SnaB一位点；下游引物为5’-GCGGCCGCACTATAGCGAAATGGATTGAG-3’,带有Not一位点。RT-PCR扩增：首先，黑曲霉保藏菌种经查氏斜面培养基活化后，接种于100ml灭菌的黑曲霉液体发酵培养基中，加少量玻璃珠，200r/min、30℃，培养66~70h,以其为实验材料,利用总RNA提取试剂合提取黑霉的总RNA。再用RNA为模板，以下游引物进行反转录，获得cDNA第一条链。65℃热变性5min，冰浴，然后加入反转录酶，置于PCR仪中，30℃10min，42℃1h，94℃2min。再以反转录产物为底物，PCR扩增目的基因，反应条件为94℃3min热变性；

94℃30s，54℃50s，72℃2min，40个循环；72℃延伸10min。反应结束后，经琼脂糖凝胶电泳，用DNA凝胶试剂盒回收大约1.9kb的片段。将回收产物连接到pGEM-T载体上，转化DH5a感受态菌，利用α互补法进行阳性克隆的初步筛选。表达载体的构建:logo筛选重组子的示意图单击此处添加大标题内容单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。为了能让您有更直观的字数感受，并进一步方便使用，我们设置了文本的最大限度，当您输入的文字到这里时，已濒临页面容纳内容的上限，若还有更多内容，请酌情缩小字号，但我们不建议您的文本字号小于14磅，请您务必注意。