生物化学 Chapter 2 氨基酸.ppt

Ka1Ka2（1）pI的计算侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的pKa1和pKa2的算术平均值。【推导】Ka1=（[Ao][H+]）/[A+]，Ka2=（[A-][H+]）/[Ao]Ka1×Ka2=[H+]2[A-]/[A+]等电点时：[A-]=[A+]，I=[H+]=（Ka1×Ka2）1/2故：pI=(Ka1+Ka2)2侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于兼性离子两边的pKa值的算术平均值。酸性氨基酸：pI=(pKa1+pKaR-COO-)/2=(pKa1+pKa2)/2碱性氨基酸：pI=(pKa2+pKaR-NH2)/2=(pKa2+pKa3)/2【解】(1)GlypI=5.97，pHpI,主要存在Ao、A+(2)AsppI=2.97，pKa2=3.86，pKa2pHpI,主要存在Ao、A-(3)LyspI=9.74,pKa1=2.18,pKa2=8.95,pKa1pHpKa2pI主要存在A2+、A+（2）AA溶液pH的计算：pH=pKa+lg[质子受体]/[质子供体]对于中性aa，加酸pKa取pKa1，加碱pKa取pKa2；知道了溶液的pH，即可计算出在任一pH条件下，一种aa中各种离子的比例。例题2:求pH=5的水溶液中，甘氨酸、天冬氨酸、赖氨酸的主要存在形式;例题3:向1L1mol/L处于等电点的甘氨酸溶液加入0.3mol的盐酸，求所得溶液的pH？若0.3molNaOH代替盐酸，则所得溶液的pH是多少？已知甘氨酸pKa1=2.34，pKa2=9.60【解】pH=pKa+lg[质子受体]/[质子供体]0.3mol/L的盐酸中，pH=pKa1+lg[Ro]/[R+]=2.34+lg(1-0.3)/0.3=2.710.3mol/L的NaOH溶液中，pH=pKa2+lg[R-]/[Ro]=9.60+lg0.3/（1-0.3）=9.234.氨基酸的化学性质(1)与茚三酮的反应氨基酸与水合茚三酮共热，发生氧化脱氨反应，生成NH3与酮酸；同时，酮酸裂解放出CO2，自身变为少一个碳的醛；水合茚三酮变为还原型茚三酮；NH3与水合茚三酮及还原型茚三酮脱水缩合，生成蓝紫色化合物。+NH3+反应特点A.反应由NH2与COOH共同参与B.茚三酮是强氧化剂C.反应非常灵敏，可在570nm测定吸光值D.测定范围：0.5-50μg/mlE.Pro、和羟脯氨酸与茚三酮直接生成黄色物质（不产生NH3），Asn则生成棕色物。应用A.氨基酸定量分析（先用层析法分离）B.氨基酸自动分析仪：用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。(2)与甲醛反应反应特点：为α-NH2的反应；常温中性条件，甲醛与α-NH2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离子；应用：氨基酸定量分析—甲醛滴定法（间接滴定）A.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂；B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂；C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1）；D.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。氨基酸的酸碱滴定(3)与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应反应特点A.为α-NH2的反应,氨基酸α-NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃)；B.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸。应用A、鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸；B、虽然多肽侧链上的ε-NH2、酚羟基也能与DNFB反应，但其生成物不同，容易与α-DNP氨基酸区分和分离。Sanger应用此法确定了胰岛素的一级结构A、肽分子与DNFB反应，得DNP-肽；B、水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸；C、分离DNP-氨基酸，层析法定性分析DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目；(4)与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应反应特点A、用于N末端分析，为α-NH2的反应；B、肽链（N端氨基酸）与